Методом тонкослойной хроматографии

Хроматографические методы разделения веществ основаны на их распределении между двумя фазами – подвижной и неподвижной. Для твердой неподвижной фазы главный физико-химический процесс – адсорбция вещества на ее поверхности. Относительная скорость перемещения частиц вдоль пути разделения зависит от их взаимодействия с неподвижной фазой. Следствие этого – определенная длина пути каждого вещества по неподвижной фазе. Отношение скорости перемещения вещества к скорости перемещения растворителя обозначают R_f. Эта величина является константой вещества для данных условий разделения и используется для идентификации.

По механизму процесса разделения хроматографические методы классифицируют на ионообменную, адсорбционную, осадочную, распределительную, окислительно-восстановительную хроматографию. По форме проведения процесса можно выделить колоночную, капиллярную и плоскостную хроматографию. Последняя может быть выполнена на бумаге и в тонком (закрепленном или незакрепленном) слое сорбента. Хроматографические методы классифицируют также по агрегатному состоянию анализируемого вещества. К ним относятся методы газовой и жидкостной хроматографии.

Преимущества метода тонкослойной хроматографии (ТСХ): простота оборудования, необходимость для выполнения анализа миллиграммовых количеств веществ, экономичность.

Метод ТСХ применяется, в частности, для определения содержания вредных веществ в продуктах питания, воде, почве, например, - остаточных количеств пестицидов.

Цель работы: Определить содержание хлорорганического пестицида – ципроконазола в пробе методом тонкослойной хроматографии.

Ципроконазол: (альто)-2-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-1(1Н-1,2,4-риазол-1-ил)бутан С₁₅Н₁₈N₃O, Молярная масса 291,78.

Растворим в хлороформе, ацетоне, метаноле, хлористом метилене.

ПДК ципроконазола: в зерновых (пшеница, ячмень) 0,05 мг/кг; в почве 0,2 мг/кг; в воде водоемов 0,03 мг/л.

Оборудование и посуда: набор для проведения ТСХ (камера хроматографическая, пульверизатор, пластины «силуфол»; капилляры или микрошприцы для нанесения пробы на пластину).

Реактивы и материалы: стандартный раствор ципроконазола в ацетоне (0,1мг/мл (100мкг/мл)); ацетон, х.ч.; хлороформ, чда; проявляющий реактив – раствор бромфенолового синего (0,05г бромфенолового синего растворяют в 10мл ацетона, доводят до 100мл 0,5%-ным водно-ацетоновым (1 часть воды + 3 части ацетона) раствором серебра азотнокислого); раствор лимонной кислоты, 2%-ный.

1. Проведение процесса хроматографирования.

На хроматографической пластине карандашом отметить линию старта на расстоянии 1-2 см от нижнего края пластины и линию финиша на расстоянии 8-10 см от линии старта.

50 мкл пробы количественно (с помощью капилляра или микрошприца) перенести на стартовую линию хроматографической пластины так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см.

На стартовую линию также с помощью капилляра или микрошприца нанести серию стандартов, содержащих 2, 5, 7 и 10 мкг ципроконазола.

Пластину с нанесенными растворами поместить в хроматографическую камеру, в которую за 30 минут до хроматографирования залита смесь хлороформ-ацетон (9:1). Во время насыщения камеры парами растворителя и во время процесса хроматографирования камера должна быть закрыта стеклянной пластиной.

После поднятия фронта подвижной фазы на 8-10 см (до линии финиша) пластину вынуть и оставить на 10 минут для испарения растворителя.

После этого пластину обработать из пульверизатора раствором бромфенолового синего.

После высушивания пластину для удаления фона растворителя обработать 2%-ным раствором лимонной кислоты.

Альто проявляется в виде пятен (2 изомера) ярко-голубого цвета на светло-желтом фоне. Величина R_f¹ – 0,45, R_f² – 0,60.

Измерить и суммировать площади обоих пятен, соответствующих каждому стандарту, для чего пятна перевести по контуру на кальку, наложить кальку на миллиметровую бумагу, по которой и подсчитать площадь. Построить калибровочный график в координатах: S (площадь пятен) – масса ципроконазола в стандартах (в мкг).

2.2. Измерить и суммировать площади пятен, соответствующих анализируемой пробе, и по графику найти массу пестицида в ней. Прямолинейная зависимость площади от массы пестицида соблюдается в интервале от 1 до 10 мкг. Если содержание препарата в пробе превышает верхнюю границу диапазона, то для нанесения на пластину необходимо брать аликвотную часть пробы (менее 50 мкл).

2.3. Вычислить концентрацию пестицида в анализируемом образце воды в мг/л.

Что будет с Землей, если ось ее сместится на 6666 км? Что будет с Землей? - задался я вопросом...

Система охраняемых территорий в США Изучение особо охраняемых природных территорий(ООПТ) США представляет особый интерес по многим причинам...

Что способствует осуществлению желаний? Стопроцентная, непоколебимая уверенность в своем...

ЧТО ТАКОЕ УВЕРЕННОЕ ПОВЕДЕНИЕ В МЕЖЛИЧНОСТНЫХ ОТНОШЕНИЯХ? Исторически существует три основных модели различий, существующих между...

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте: