Сдам Сам

ПОЛЕЗНОЕ


КАТЕГОРИИ







Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах





Стоматологический факультет

ЗАНЯТИЕ № 1.1.4

 

ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ

 

Цель занятия:

изучить культуральные и биохимические свойства бактерий; основные биологические свойства аэробов, методы выявления чистых культур аэробов с целью их идентификации.

 

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

  1. Метаболизм бактерий.
  2. Питание бактерий.
  3. Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по ферментативной активности.
  4. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
  5. Основные принципы культивирования.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

 

· описать культуральные и биохимические свойства бактерий.

 

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей.

Работа № 1. Методы выделения и идентификации аэробных бактерий

Цель: изучить основные методы выделения и идентификации аэробов (см. теоретическую справку).

I

 

 


II

 

 

III


А)

IV
*


Ж)

Б)

)

Е)

 

 

В)

Д)

 

Реакция агглютинации

Г)

 

I. Сбор исследуемого материала

II. Посев исследуемых микроорганизмов на простые, ДДС и элективные питательные

среды с целью получения изолированных колоний

III. Накопление чистой культуры на скошенной питательной среде

IV. Идентификация выделенной чистой культуры

А) изучение морфологических и тинкториальных свойств

Б) изучение культуральных свойств

В) изучение антигенной структуры возбудителя с помощью постановки реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными сыворотками

Г) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на среды Гисса

Д) определение чувствительности микробов к антибиотикам, с помощью метода бумажных дисков

Е) проба с бактериофагами (реакция фаголизабельности)

Ж) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания

* проведение внутривидовой идентификации для выявления источников инфекции (фаготипирование)

 

Работа № 2. Питательные среды

 

Цель: ознакомиться с питательными средами, используемыми для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях.

 

Самостоятельная работа: классифицировать предложенные питательные среды; результаты оформить в виде таблицы (см. теоретическую справку).

среда происхождение консистенция назначение
  естест-венное искусст-венное жидкая полу- жидкая плотная общего ДДС электив- ные
Мясо- пептонный агар (МПА)                
Мясо- пептонный бульон (МПБ)                
Среда Эндо                
Кровяной агар                
Тиогликолевая среда                
Среды Гисса                
Среда Сабуро                
Свернутая сыворотка                
Желточно- солевой агар (ЖСА)                

 

Вывод:

 


Работа № 3. Характер роста бактерий на плотных питательных средах

(культуральные свойства)

 

Цель: изучить культуральные свойства микроорганизмов на плотных питательных средах.

Самостоятельная работа: по предложенным критериям описать колонии микроорганизмов, выросших на МПА (посев воздуха); результаты внести в таблицу; сделать вывод.

 

Критерии Описание Колонии
1) Форма Округлая, овальная  
2) Размер Мелкий – 1-2 мм; средний – 3-4 мм; крупный 5 мм и более  
3) Характер края Ровный (S-форма); неровный (R-форма): зубчатый, звездчатый, фестончатый, волнообразный и др.  
4) Пигмент (цвет) Пигментированные колонии – цвет колоний отличается от цвета питательной среды (пигмент м.б. малиновый, белый, желтый, зеленый, золотистый и др.). Непигментированные – колонии под цвет питательной среды  
5) Поверхность Плоская, выпуклая, куполообразная, с выпуклым центром, с вогнутым центром, шероховатая, бугристая и т.д.  
6) Прозрачность Непрозрачные, полупрозрачные, прозрачные  
7) Структура Гомогенная, негомогенная  
8) Консистенция (вязкость) Сухая, вязкая, слизистая, маслообразная, сметанообразная и т.д.  

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Цель: изучить особенности роста микроорганизмов на жидких питательных средах.

Самостоятельная работа: описать культуральные свойства бактерий на МПБ и 1% ПВ, зарисовать, сделать вывод.

 

 


Опыт № 1 Опыт № 2 Опыт № 3

МПБ МПБ 1% пептонная вода

(кишечная палочка) (возбудитель газовой гангрены) (возбудитель холеры)

Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

А) что изображено на схеме?

Б) охарактеризовать все фазы процесса.

 

 

1 2 3 4


______________________________________________________________________________

Подпись преподавателя______________________________________________________________

Теоретическая справка

к работе № 1

Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий

Бактериологический метод является основным при диагностике инфекционных заболеваний. Его сущность заключается в определении вида возбудителя инфекции, следовательно, можно поставить этиологический (окончательный) диагноз. Основной недостаток метода – длительность исследования – от 3-х до 5-ти суток, а в отдельных случаях и более.

Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию. При этом необходимо соблюдать ряд правил:

1. Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после введения последней дозы антибиотика. Чтобы избежать загрязнения пробы микрофлорой окружающей среды, необходимо соблюдать строжайшую антисептику. Для этого используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); б) проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; в) шприц для взятия крови, гноя; г) стерильную посуду для непосредственного сбора в нее мочи, мокроты, испражнений.

2. Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.

3. Направление прилагают к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа. Оно содержит основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования:

- фамилия, имя, отчество, возраст пациента;

- предполагаемый диагноз заболевания;

- предшествующая антимикробная терапия;

- характер материала;

- дата и время взятия материала;

- цель исследования;

- название лечебного учреждения, номер отделения, палаты;

- подпись лечащего врача.

Бактериологический метод осуществляется в два этапа:

1. Выделение чистой культуры возбудителя (1-2 суток).

2. Идентификация чистой культуры (1-3 суток).

На первом этапе проводится посев исследуемого материала на плотную или жидкую питательную среду, оценка культуральных свойств (характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах; они устанавливаются по характеру роста на питательной среде), отбор подозрительных колоний и их отсев на скошенный агар. Этап идентификации включает обязательное изучение морфологии, биохимических свойств и антигенной структуры выделенной чистой культуры, а также проведение дополнительных исследований по определению антибиотикочувствительности, фагочувствительности, фаготипирования, изучение патогенности и персистентных свойств.

К работе № 2

Микроорганизмам, как всему живому, присущи три основные физиологические функции: питание, дыхание и размножение.

Питание необходимо для синтеза в клетке всех органических структур, оно осуществляется с поглощением энергии. Основным источником энергии являются окислительно-восстановительные процессы (дыхание). Для питания нужны органогены: О, С, Н, N, F, K, Mg, Ca; микроэлементы: Na, Zn, Cu, Cl, Mn, Mo, Co, Ni, W; факторы роста: витамины, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, липиды. Кислород и водород микробы берут из воздуха и воды.

По типу питания микробы делятся на аутотрофов и гетеротрофов. Аутотрофы усваивают азот и углерод из неорганических веществ (углекислый газ и др.), а гетеротрофы - из сложных органических соединений (аминокислоты, моносахара и др.), синтезированных ранее другими живыми организмами. Гетеротрофы в свою очередь делятся на сапрофитов и паразитов. Сапрофиты нуждаются в органических соединениях мертвого субстрата, а паразиты получают питательные вещества в организме-хозяине. Паразиты могут быть облигатными (внутриклеточными) и факультативными. Облигатные внутриклеточные паразиты (хламидии) лишены способности жить и размножаться вне клеток хозяина, т.к. зависят от их метаболизма. Факультативные паразиты (гонококки, стафилококки и др.) могут питаться как в организме, так и вне его, поскольку обеспечены автономными ферментными системами при образовании веществ и энергии.

К работе № 3, 4

Метод Дригальского

Берут 3 чашки Петри с МПА, стерильной пипеткой материал помещают на поверхность МПА в чашку № 1

посев шпателем (газоном) посев петлей (штрихом)

Стерильным шпателем материал Чашку Петри с МПА делят на

тщательно распределяют по 4 сектора. Исследуемый мате-

поверхности агара. Затем, не беря риал стерильной петлей вносят

нового материала и, не обжигая в 1 сектор и делают штрихи,

шпателя, делают посев на 2 и 3 затем такие же линии проводят

чашку МПА. и на других секторах.

На последних секторах вырастают

отдельные колонии.

1 2 3 1 2

 

изолированные колонии 4 3

4 сектор - изолированные колонии

Снижение концентрации микробов

Колония – видимое невооруженным взглядом скопление микробов на плотной питательной среде, выросшее из одной клетки. Т.к. все микробы в колонии выросли из одной клетки, они относятся к одному виду, т.е. в каждой изолированной колонии (отдельно стоящей, не сливающейся с другими колониями) содержится чистая культура.

Метод седиментации по Коху -основан на свободном оседании микроорганизмов на питательную среду в чашку Петри из воздуха. Применяется для определения загрязненности воздуха микроорганизмами.

Метод укола -применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, т.к. рост по ходу укола типичен для ряда бактерий. Также применяется для длительного хранения культур.

Посев на скошенный агар – применяется для накопления биомассы, получения чистой культуры и их хранения.

Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине.

Этот метод применяется для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).

 

Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов

Метод Шукевича

Техника посева. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды дают «ползущий» рост по скошенному агару. Для получения чистой культуры ее отсевают с верхнего края посева.

Метод прогревания

Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 мин. Вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают.

Бактериостатический метод (метод ингибирования)

Основан на избирательном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы. Например, антибиотики позволяют очистить исследуемый вируссодержащий материал от сопутствующей бактериальной флоры. Серная кислота (5% р-р) быстро убивает большинство бактерий, а туберкулезная палочка выживает в этих условиях.

Метод заражения лабораторных животных или растений

Применяют в целях выделения и идентификации патогенных микроорганизмов и отделения их от сапрофитной флоры. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных или сорта растений.

После появления у зараженных организмов признаков болезни их убивают и производят посев органов и тканей на питательные среды. При выделении и изучении облигатных паразитов этот метод является основным и единственным.

Посев на жидкие питательные среды

Применяют для изучения типа дыхания микробов. Посев проводится петлей или пипеткой. Дыхание микроорганизмов – биологическое окисление субстрата с выделением необходимой для метаболизма энергии. По типу дыхания микроорганизмы делятся на 3 основные группы: аэробы могут жить только в присутствии кислорода (холерный вибрион) – рост на поверхности питательной среды; факультативные анаэробы могут жить при любом процентном содержании кислорода и без него (кишечная палочка) – диффузный рост в толще питательной среды; анаэробы (облигатные) – только в отсутствие кислорода (возбудители газовой гангрены) – придонный рост.

 

к работе № 5

Стоматологический факультет

ЗАНЯТИЕ № 1.1.4

 

ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ

 

Цель занятия:

изучить культуральные и биохимические свойства бактерий; основные биологические свойства аэробов, методы выявления чистых культур аэробов с целью их идентификации.

 

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

  1. Метаболизм бактерий.
  2. Питание бактерий.
  3. Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по ферментативной активности.
  4. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
  5. Основные принципы культивирования.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

 

· описать культуральные и биохимические свойства бактерий.

 

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей.

Работа № 1. Методы выделения и идентификации аэробных бактерий

Цель: изучить основные методы выделения и идентификации аэробов (см. теоретическую справку).

I

 

 


II

 

 

III


А)

IV
*


Ж)

Б)

)

Е)

 

 

В)

Д)

 

Реакция агглютинации

Г)

 

I. Сбор исследуемого материала

II. Посев исследуемых микроорганизмов на простые, ДДС и элективные питательные

среды с целью получения изолированных колоний

III. Накопление чистой культуры на скошенной питательной среде

IV. Идентификация выделенной чистой культуры

А) изучение морфологических и тинкториальных свойств

Б) изучение культуральных свойств

В) изучение антигенной структуры возбудителя с помощью постановки реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными сыворотками

Г) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на среды Гисса

Д) определение чувствительности микробов к антибиотикам, с помощью метода бумажных дисков

Е) проба с бактериофагами (реакция фаголизабельности)

Ж) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания

* проведение внутривидовой идентификации для выявления источников инфекции (фаготипирование)

 

Работа № 2. Питательные среды

 

Цель: ознакомиться с питательными средами, используемыми для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях.

 

Самостоятельная работа: классифицировать предложенные питательные среды; результаты оформить в виде таблицы (см. теоретическую справку).

среда происхождение консистенция назначение
  естест-венное искусст-венное жидкая полу- жидкая плотная общего ДДС электив- ные
Мясо- пептонный агар (МПА)                
Мясо- пептонный бульон (МПБ)                
Среда Эндо                
Кровяной агар                
Тиогликолевая среда                
Среды Гисса                
Среда Сабуро                
Свернутая сыворотка                
Желточно- солевой агар (ЖСА)                

 

Вывод:

 


Работа № 3. Характер роста бактерий на плотных питательных средах

(культуральные свойства)

 

Цель: изучить культуральные свойства микроорганизмов на плотных питательных средах.

Самостоятельная работа: по предложенным критериям описать колонии микроорганизмов, выросших на МПА (посев воздуха); результаты внести в таблицу; сделать вывод.

 

Критерии Описание Колонии
1) Форма Округлая, овальная  
2) Размер Мелкий – 1-2 мм; средний – 3-4 мм; крупный 5 мм и более  
3) Характер края Ровный (S-форма); неровный (R-форма): зубчатый, звездчатый, фестончатый, волнообразный и др.  
4) Пигмент (цвет) Пигментированные колонии – цвет колоний отличается от цвета питательной среды (пигмент м.б. малиновый, белый, желтый, зеленый, золотистый и др.). Непигментированные – колонии под цвет питательной среды  
5) Поверхность Плоская, выпуклая, куполообразная, с выпуклым центром, с вогнутым центром, шероховатая, бугристая и т.д.  
6) Прозрачность Непрозрачные, полупрозрачные, прозрачные  
7) Структура Гомогенная, негомогенная  
8) Консистенция (вязкость) Сухая, вязкая, слизистая, маслообразная, сметанообразная и т.д.  

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Цель: изучить особенности роста микроорганизмов на жидких питательных средах.

Самостоятельная работа: описать культуральные свойства бактерий на МПБ и 1% ПВ, зарисовать, сделать вывод.

 

 


Опыт № 1 Опыт № 2 Опыт № 3

МПБ МПБ 1% пептонная вода

(кишечная палочка) (возбудитель газовой гангрены) (возбудитель холеры)

Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________







Живите по правилу: МАЛО ЛИ ЧТО НА СВЕТЕ СУЩЕСТВУЕТ? Я неслучайно подчеркиваю, что место в голове ограничено, а информации вокруг много, и что ваше право...

ЧТО И КАК ПИСАЛИ О МОДЕ В ЖУРНАЛАХ НАЧАЛА XX ВЕКА Первый номер журнала «Аполлон» за 1909 г. начинался, по сути, с программного заявления редакции журнала...

ЧТО ТАКОЕ УВЕРЕННОЕ ПОВЕДЕНИЕ В МЕЖЛИЧНОСТНЫХ ОТНОШЕНИЯХ? Исторически существует три основных модели различий, существующих между...

Что делает отдел по эксплуатации и сопровождению ИС? Отвечает за сохранность данных (расписания копирования, копирование и пр.)...





Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:


©2015- 2024 zdamsam.ru Размещенные материалы защищены законодательством РФ.