|
Виды роста бактерий на жидких и плотных
Питательных средах
| Плотные среды
| Жидкие среды
| | Изолированные колонии – скопление особей одного вида бактерий, образующееся в результате размножения одной клетки на поверхности питательной среды (или в глубине ее) и не соприкасающееся краями с другими колониями
| Пленка – поверхностный рост (холерный вибрион)
Осадок– скопление бактерий на дне (клостридии)
Пристеночный рост – налет на стенках пробирки (стрептококк)
Диффузный – помутнение всей среды (стафилококк, кишечная палочка)
|
Таблица 47
Фаза развития бактериальной популяции
| Название фазы
| Характеристика фазы
| Длитель-ность фазых
| | 1.Исходная стационарная
| Начинается после внесения бактерий в питательную среду, число бактерий не увеличивается
|
1-2 ч
| | 2. Лаг-фаза (задер-жки размножения)
| Начало интенсивного роста клеток, скорость размножения невысока
|
1-2 ч
| | 3. Лог-фаза
(логарифмическая = экспоненциальная)
| Максимальная скорость размножения клеток и увеличение численности бактериальной популяции в геометрической прогрессии
|
5-6 ч
| | 4. Отрицательного ускорения
| Скорость размножения бактерий замедляется, число делящихся особей уменьшается
|
2 ч
| | 5. Максимальная стационарная
| Характеризуется равновесием между числом погибших, вновь образующихся и находящихся в состоянии покоя
|
2 ч
| | 6. Ускорения гибели
| Наступает нарушение равновесия в сторону гибели
| 3 ч
| | 7. Логарифмической гибели клеток
| Отмирание особей происходит с постоянной скоростью
|
5 ч
| | 8. Уменьшения скорости отмирания клеток
| Остающиеся в живых особи переходят в состояние покоя
|
| ______________________
х – продолжительность фаз приведена условно, т.к. она может варьировать в зависимости от вида бактерий и условий культивирования.
ПРИНЦИПЫ И МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Таблица 48
Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней
|
В бактериологических лабораториях проводятся исследования с целью диагностики кишечных и гнойных инфекций, дифтерии, туберкулеза и др., а также осуществляется микробиологический контроль за стерилизацией и дезинфекцией.
Диагностика особо-опасных инфекций (чума, туляремия, бруцеллез, холера и др.) проводится в специальных режимных лабораториях
| | Правила работы в лаборатории
| | 1. Работать необходимо в халатах, шапочках и при необходимости в масках. Вход без халата в лабораторию категорически запрещен!
| | 2. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу
| | 3. На рабочем столе не должно быть ничего лишнего. Личные вещи хранят в специально отведенном месте
| | 4. При попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности необходимо тщательно обработать это место дезинфицирующим раствором
| | 5. Хранение и уничтожение культур должны проводить специально обученные сотрудники, согласно инструкции. Движение культур внутри лаборатории необходимо регистрировать в рабочем журнале
| | 6. По окончании работы необходимо вымыть руки с мылом, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором
|
Таблица 49
Оборудование микробиологических лабораторий
| Прибор
| Назначение
| | Термостат
| Аппарат, в котором поддерживается постоянная температура, применяется для культивирования микроорганизмов. Оптимальная температура для размножения большинства бактерий 37 о С. Термостаты бывают воздушными и водяными
| | Микроанаэростат
| Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях
| | Холодильник
| Используется в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин, сывороток и других биологически активных препаратов при температуре около 4 о С
| | Центрифуга
| Применяется для осаждения микроорганизмов, эритроцитов и других клеток
| | Печь Пастера
(сушильно-стерилизацион-ный шкаф)
| Применяется для воздушной стерилизации лабораторной посуды
| | Автоклав (паровой стерилизатор)
| Предназначен для стерилизации паром под давлением. В автоклаве стерилизуют питательные среды.
| | Каждое рабочее место должно быть снабжено спиртовкой и банкой с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами, химическими реактивами, диагностическими препаратами. Для окраски микроскопических препаратов в лаборатории должно быть выделено место, где находятся растворы красителей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага
|
Таблица 50
Условия культивирования бактерий
| 1. Наличие питательной среды, содержащей все необходимые питательные вещества и факторы роста бактерий
| | 2. Создание оптимальной концентрации водородных ионов (рН) = 7,2-7,4; некоторые бактерии растут в щелочной среде (для холерного вибриона рН = 7,8-8,6); другие – в кислой (для ацидофильных бактерий рН = 4,0-6,0)
| | 3. Оптимальная температура для большинства бактерий (мезофилы) составляет 370; некоторые (психрофилы) предпочитают температуру 15-200 (возбудители чумы и лептоспироза); другие (термофилы) – 50-600 (бактерии, обитающие в горячих источниках)
| | 4. Длительность культивирования для большинства бактерий составляет 24-48 ч; некоторые растут дольше (бактерии коклюша – 2-3 сут, микробактерии туберкулеза – 3-4 нед.)
| | 5. Среды должны быть стерильными
| | 6. Создание аэробных или анаэробных условий
|
Таблица 51
Классификация питательных сред
|
По проис-хождению
| Естественные – натуральные продукты животного, растительного или микробного происхождения
| Молоко, сыворотка, кровь, картофель, морковь
| | Синтетические – химически чистые соединения в строго определенных концентрациях = минимальные среды
| Основа: минераль-ные соли и глюкоза
| | Полусинтетические – минимальные среды, к которым добавлен пептон и дрожжевой экстракт
|
|
Окончание табл. 51
|
По сложности изготовления
| Простые – выпускаются промышленностью в сухом виде; основу их составляют пептоны – продукты ферментативного или кислотного гидролиза белков животных и рыбы
| Питательный бульон, питательный агар
| | Сложные - готовятся на основе простых: добавляют 1% сахара, 10-20% сыворотки крови или 5-10% крови
| Кровяной агар, сахарно-сыворо-точный агар
| |
По консистенции
| Жидкие – мясной или рыбный бульон на дистиллированной воде
| Питательный бульон
| | Плотные– готовятся на основе жидких, добавляют 1,5% агар-агара или силикагеля или 10-15% желатины
| Питательный агар
| | Полужидкие – готовят на основе жидких, но агар-агара или силикагеля добавляют 0,7%, а желатины – 5-7,5%
| Полужидкий пита-тельный гар
| |
По наз-начению
| Консервирующие – применяются для предотвращения отмирания бактерий в патологическом материале
| Глицериново-солевая смесь
| | Основные– применяются для культивирования большинства бактерий
| Питательные бульон и агар
| | Элективные – обеспечивают оптимальные условия для выращивания одного вида бактерий
| Желточно-солевой бульон для стафилококка, желчный бульон для сальмонелл
| | Дифференциально-диагностические – применяются для изучения биохимических свойств при идентификации бактерий
| Среды Гисса, Ресселя, Эндо
| Таблица 52
Методы стерилизации
| Асептика– система мероприятий, предупреждающих внесение м/ох из окружающей среды в ткани или полости организма человека при лечебных и диагностических манипуляциях, а также в материал для исследования, в питательные среды и культуры м/о при лабораторных исследованиях
| | Антисептика– комплекс лечебно-профилактических мероприятий, направленных на уничтожение м/о, способных вызвать инфекционный процесс на поврежденных или интактных участках кожи и слизистых оболочек.
Антисептики: 70% этиловый спирт, 5% спиртовой р-р йода,0,5-2% раствор хлорамина, 0,1% р-р КМnO4, 0,5-1% р-р формалина, 1-2% р-ры метиленового синего или бриллиантового зеленого
| | Дезинфекция– обеззараживание объектов окружающей среды: уничтожение патогенных м/о с помощью химических веществ: хлорная известь – 0,1-10% р-р, хлорамин – 0,5-5% р-р, фенол или карболовая кислота – 3-5% р-р, лизол – 3-5% р-р
| | Стерилизация – обеспложивание, т.е. полное уничтожение вегетативных форм м/о и их спор в различных материалах
| | 1) Физические методы стерилизации:
| | Прокаливание – в пламени спиртовки (петли, инструменты)
| | Кипячение – в воде с добавлением 1-2% р-ра бикарбоната натрия 30 мин (шприцы, мелкий хирургический инструментарий, предметные стекла)
| | Сухим жаром в печи Пастера – нагревание до 165-1700 в течение 45 мин (чашки Петри, пробирки, пипетки)
| | Паром под давлением в автоклаве – большинство питательных сред – Р = 1 атм (t = 121 0C) 20 мин; среды с углеводами –
Р = 0,5 атм (t = 111 0C) 15 мин; уничтожение патогенного материала – Р = 2 атм (t = 1330 C) 20-25 мин. Для контроля качества стерилизации в автоклав помещают ампулы с бензонафтолом (Тпл = 110 0С) или с бензойной кислотой (Тпл = 120 0С)
| | Текучим паром в автоклаве – при незавинченной крышке и открытом выпускном клапане при Т=100 0С по 20-30 мин 3 дня (среды с витаминами или углеводами)
| Окончание табл. 52
| Тиндализация – дробная стерилизация при Т = 56-58 0С
5-6 дней подряд (сыворотка крови, витамины)
| | Пастеризация – нагревание при Т = 56-65 0С с последующим быстрым охлаждением (вино, пиво, соки, молоко)
| | Ультрафиолетовыми лучами - с длиной волны 260-300 мкм лампами БУВ-15, БУВ-30 (воздух) или гамма-лучами (одноразовые шприцы, системы)
| | 2) Механическая стерилизация (фильтрование) –
– задержка м/о, их спор мелкопористыми фильтрами (керамическими, асбестовыми, стеклянными) с определенным диаметром (сыворотка крови, антибиотики)
| | 3) Химическая стерилизация–
– газами: формальдегид и окись этилена в специальных камерах при 40-80 0С (оптика, некоторые питательные среды)
| ______________
х - м/о – микроорганизм.
Таблица 53
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
|
