Оборудование и среды для взятия материала

Для взятия и транспортировки биологического материала следует использовать одноразовые стерильные тубсеры (пробирки с тампонами) промышленного производства или транспортные системы со средой. Ватные (хлопковые) тампоны, изготовляемые непосредственно в лаборатории из медицинской ваты, могут быть использованы только в крайнем случае, так как медицинская вата может обладать антимикробными свойствами.

Для снятия возможного бактерицидного действия тампоны из медицинской ваты после изготовления кипятят в буферном растворе Соренсена (18 мл 1/15М раствора КН2Р04 + 8,2 мл 1/15 М раствора NaHP04; pH 7,4), встряхивают, высушивают в термостате, помещают в пробирки и стерилизуют в автоклаве при 120°С 30 минут.

Если тампоны предназначены для взятия материала на гонорею, их 20 минут кипятят в фосфатном буфере (181,7 мл 0,2М NaH,P04 + 18,3 мл 0,1 М раствора лимонной кислоты; рН 7,4) и импрегнируют в течение 24 часов в 1 % водной суспензией тонко измельченного древесного угля. Затем тампоны высушивают, подправляют, монтируют в пробки и стерилизуют в автоклаве при 120°С 20 минут.

Для транспортировки материала целесообразно использовать специальные транспортные системы со средой. Их выбор с учетом вида материала, цели исследования и технических возможностей осуществляет лаборатория. К. числу наиболее универсальных транспортных сред относятся среда Стюарта и среда Эймс.

Транспортная система со средой Стюарта. Среда Стюарта представляет собой полужидкий, бедный питательными веществами субстрат для сохранения и транспортировки широкого спектра патогенных микроорганизмов, таких, как Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. и др. Наиболее требовательные микроорганизмы сохраняются в данной среде более суток, прочие - до нескольких дней. Наличие в среде тиогликолата подавляет ферментативную активность бактерий, а отсутствие азота предотвращает их размножение.

Транспортная система со средой Кери Блейр. Представляет собой модификацию базовой транспортной среды Стюарта, предназначенную специально для фекальных образцов. Глицерофосфат, являющийся метаболитом некоторых энтеробактерий (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, и др.), заменен неорганическим фосфатом, удален метиленовый синий, и рН среды поднята до 8,4.

Среда Кери Блейр позволяет сохранять большинство патогенов, включая требовательные микроорганизмы, такие, как Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp. Данная среда является стандартной для транспортировки анаэробов.

Транспортная система со средой Эймса Представляет собой очередную модификацию базовой транспортной среды Стюарта, в которой глицерофосфат заменен неорганическим фосфатом. Эта среда способна более 3 дней поддерживать такие микроорганизмы, как Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae и др., однако наилучшие результаты дает культивирование в течение первых 24 часов. При использовании транспортной системы со средой срок доставки пробы в лабораторию может быть продлен максимально до 72 часов.

Техника взятия основных видов биологического материала

Показания к проведению исследования: клиническая картина сепсиса; лихорадочные состояния неустановленной этиологии; пневмонии; подозрение на инфекционные заболевания: брюшной тиф и паратифы, сальмонеллезы, бруцеллез, возвратный тиф, лептоспирозы, малярия, эпидемический менингит, пневмококковые инфекции, пищевые токсикоинфекции (при наличии лихорадки), стафилококковые и стрептококковые инфекции, сибирская язва, туляремия, чума.

Количество независимо отбираемых проб крови и время их взятия определяется лечащим врачом (табл. 1). Как правило, должны исследоваться не менее 2—3 проб крови, каждая из которых взята путем отдельной венепункции. Это необходимо для дифференциации истинной бактериемии от случайной контаминации крови при венепункции. Вероятность загрязнения вследствие случайного прокола сальной или потовой железы составляет 3%.

Таблица 1. Рекомендуемое число отбираемых проб крови в зависимости от клинической ситуации

Острый сепсис, менингит, менингококцемия, остеомиелит, артрит, острая пневмония, пиелонефрит - из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда перед началом антибактериальной терапии;

Лихорадка неясного генеза - сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов (двух участков сосуда), затем через 24—36 ч. еще 2 пробы

Эндокардит, вялотекущий сепсис: в период обострения при подостром или вялотекущем течении - из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда первые 1— 2 часа подъема температуры тела, до начала терапии сначала 3 пробы с интервалом 15 мин. и более. Если они отрицательны, на вторые сутки собирают еще 3

Эндокардиты у пациентов: получающих антибактериальную терапию на фоне антибиотикотерапии - по 2 отдельные пробы в течение трех дней в течение 48 ч

Примечание: У больных, получающих антибактериальные препараты, пробы необходимо собирать непосредственно перед введением следующей дозы препарата. При наличии лихорадки оптимальным является взятие крови на фоне повышения температуры тела (но не на пике температуры!).

1. Шприцы одноразовые 20-граммовые (для детей 10-граммовые) с иглами для венепункции. Запрещается использовать шприцы со «стерильного стола» в перевязочной, проверять проходимость иглы, просасывая через нее воздух.

2. Флаконы с питательными средами: среда для аэробов и факультативных анаэробов + среда для облигатных анаэробов (например, двойная среда + среда СКС) или универсальная среда для аэробов и анаэробов. Предпочтительно использовать промышленно произведенные среды, разрешенные к применению. Оптимальным средством отбора пробы венозной крови являются вакуумные двухфазные флаконы к аппарату Бактек (Bactec).

5. Резиновые (латексные, виниловые) перчатки.

6. Спиртовка (только при использовании флаконов со средами, изготовленными в лаборатории).

Манипуляции проводят с соблюдением правил асептики. Кровь берут у постели больного или в перевязочной (процедурной) и тут же засевают на питательные среды. Рекомендуется осуществлять эти процедуры вдвоем. Один медицинский работник проводит обработку кожи больного, венепункцию и взятие крови, второй, в это время открывает над пламенем спиртовки пробки флаконов со средами, подставляет их под струю крови из шприца, обжигает горлышки флаконов и закрывает их. Кровь для исследования получают путем венепункции. Порядок обработки кожи и взятия крови следующий:

1. кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70° спиртом;

2. наносят 2-5% йодную настойку, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 сек.;

3. после высыхания йодной настойки проводят венепункцию;

4. пальпировать сосуд в районе введения иглы после обработки кожи нельзя;

У взрослых кровь берут в объеме 10-20 мл, у детей — в зависимости от возраста.

Сразу после взятия кровь засевают на питательные среды. Соотношение крови и среды должно быть 1/10—1/60 для устранения бактерицидного действия крови путем ее разведения. Техника посева зависит от вида используемых питательных сред.

При использовании сред лабораторного приготовления, расфасованных во флаконы с целлюлозными (ватными) пробками, посев проводят следующим образом:

· вносят половину крови из шприца во флакон;

· обжигают горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки;

· осторожно, чтобы не замочить пробку, перемешивают содержимое флакона круговыми движениями;

· вторую порцию крови из шприца вносят во второй флакон, повторяя указанные операции.

При использовании флаконов со средами промышленного изготовления во флаконах с резиновыми либо пластиковыми пробками:

· при наличии на флаконах защитных колпачков их удаляют (отгибают), не открывая при этом пробки;

· пробки флаконов обрабатывают 70% этиловым спиртом (использование йодной настойки определяется рекомендациями производителя сред);

· кровь в равных объемах вносят в «аэробную» и «анаэробную» питательные среды, проколов при этом пробки флаконов. Если предполагается проведение бактериоскопического исследования, дополнительно готовят препарат «толстая капля» и мазок.

Для приготовления мазка каплю крови диаметром 2—3 мм наносят на обезжиренное предметное стекло вблизи от торца. Перед каплей крови ставят под углом 45° одноразовый пластиковый шпатель для растяжки мазков или стекло со шлифованным краем и плавным движением равномерно распределяют материал по поверхности.

Для приготовления препарата «толстая капля» на стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм и распределяют ее с помощью иглы или пипетки в диск диаметром 10—15 мм. Толщина капли должна позволять видеть через нее газетный шрифт. Иногда мазок и препарат «толстая» капля готовят на одном стекле. Для этого на поверхность приготовленного как описано выше мазка до его высыхания наносят еще одну каплю крови. Она, как правило, сама растекается в правильный диск необходимой толщины.

Препараты высушивают («толстая капля» сохнет 2—3 часа) и доставляют в лабораторию в специальном планшете для хранения и транспортировки стекол с соблюдением необходимой осторожности. Посевы крови немедленно доставляют в лабораторию, оберегая от охлаждения.

Бактериологическая лаборатория при исследовании посевов крови выдает отрицательный ответ в случае, если рост микроорганизмов не обнаружен в течение 10 дней инкубации. В случае наличия у больного подозрения на внутрисосудистую инфекцию или бруцеллез возникает необходимость пролонгированной (до 1 месяца) инкубации посевов. Это должно быть особо отмечено в направлении. Рутинный посев крови не обеспечивает выявления ряда микроорганизмов.

Показания к проведению исследования: подозрение на нейроинфекцию.

При подозрении на гнойный менингит в обязательном порядке в лабораторию направляют:

1. Ликвор для первичного посева, бактериоскопии и серологических исследований в количестве не менее 1,0 мл.

2. Ликвор в 0,1% полужидком агаре (среда «обогащения»).

3. «Толстая капля» крови для бактериоскопии.

4. Кровь в жидкой питательной среде или в 0,1% полужидком агаре (среда обогащения) для бактериологического накопления культуры: 5,0 мл крови засевают в 50,0 мл среды обогащения.

5. Кровь в количестве не менее 2-х мл для серологических исследований (РПГА, ВИЭФ, ЛА и др.).

Игла для люмбальной пункции. Мандрены. Анестетик. 70° этиловый спирт. 2% или 5% настойка йода или другой антисептик, разрешенный к применению. Перевязочный материал. Стерильные пластиковые пробирки, лучше центрифужные с завинчивающимися крышками. Шоколадный агар (желательно). 0,1% полужидкий агар.

Ликвор получают путем люмбальной пункции. Желательно взять материал сразу при поступлении больного в стационар, до начала лечения. Пункция и взятие материала проводятся с соблюдением всех правил асептики, персонал работает в масках.

· Больной укладывается в положение на боку, головной конец кровати максимально опущен, голова прижата к груди, ноги — к животу, спина максимально согнута. Определяются необходимые для выбора места пункции анатомические ориентиры. Пункцию проводят между поясничными позвонками L3-L4, L4-L5 или пояснично-крестцовыми L5-S1.

· Обрабатывают область пункции сначала раствором антисептика, а затем 70° спиртом. Пальпируют рукой в стерильных перчатках точку пункции и вводят раствор анестетика.

· Проводят пункцию иглой со вставленным мандреном до ощущения «провала». Извлекают мандрен.

· Первую порцию ликвора берут в отдельную пробирку для проведения общего ликворологического исследования. Вторую порцию, предназначенную для бактериологического исследования, собирают в стерильную центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой.

Ликвор после пункции распределяют следующим образом: 1) 1,0 мл направляют в клиническую лабораторию для проведения общего ликворологического и цитологического исследования;

2) 0,2 мл направляют для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР);

3) 1,0 мл направляют для первичного бактериологического посева (если не сделан в отделении при пункции), бактериоскопии и серологических исследований; для бактериологического и бактериоскопического исследований отбирается либо вторая порция ликвора, либо самая мутная из всех. Ее отбирают в стерильную, желательно центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой;

4) 0,5 мл засевают в чашку с «шоколадным» агаром непосредственно у постели больного. Далее чашку хранят в условиях термостата при 37°С до доставки в лабораторию;

5) 0,5 мл засевают в 5,0 мл 0,1% полужидкого питательного агара непосредственно у постели больного и далее хранят при +37°С в условиях термостата до доставки в лабораторию;

Касаться руками краев канюли, иглы, пробирки, класть пробку — нельзя. Доставлять материал в бактериологическую лабораторию лучше в термостатированной переноске (сумке) на грелке с водой + 37—38°С; в отсутствие возможности немедленно доставить материал в лабораторию, его лучше поместить в транспортную систему со средой Эймс (с углем или без него) и тогда его можно хранить в термостате до 48 часов. Доставка материала в транспортной системе должна производиться также с обеспечением мер поддержания температуры +37°С. При необходимости проведения вирусологических исследований пробы ликвора в стерильной пластиковой пробирке помещают в холодильник при температуре +2...+8°С или замораживают.

ЧТО ПРОИСХОДИТ ВО ВЗРОСЛОЙ ЖИЗНИ? Если вы все еще «неправильно» связаны с матерью, вы избегаете отделения и независимого взрослого существования...

Система охраняемых территорий в США Изучение особо охраняемых природных территорий(ООПТ) США представляет особый интерес по многим причинам...

Что делает отдел по эксплуатации и сопровождению ИС? Отвечает за сохранность данных (расписания копирования, копирование и пр.)...

Что способствует осуществлению желаний? Стопроцентная, непоколебимая уверенность в своем...

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте: