|
Лабораторная диагностика эшерихиозов и дизентерии
Лабораторная диагностика эшерихиозов. Материалом для лабораторной диагностики эшерихиозов и других коли-инфекций. служат испражнения больных, отделяемое из зева и носа, трупный материал (кровь, желчь, печень, селезенка, легкие, содержимое тонкого и толстого кишечника, гной). Посев исследуемого материала производят на плотные питательные среды (Эндо, Левина, Мак Конки и др.), параллельно делают посевы для выделения тифозно-паратифозной и дизентерийной групп бактерий на среды Плоскирева и висмут-сульфитагар. При подозрении на септический процесс сеют кровь для обогащения в бульон, а затем высевают на плотную среду. Выделенные чистые культуры идентифицируют по морфологическим, куль туральным, биохимическим, серологическим и биологическим свойствам Принадлежность выделенных эшерихий к патогенным сероварам соответствующих О-групп устанавливают в реакции агглютинации после разрушения кипячением К-антигена исследуемой культуры. Реакция агглютинации ставится с ОК и О-сыворотками. Для ускоренной идентификации выделенных культур или исследуемого материала применяют метод иммунофлюоресценции с использованием группоспецифических меченых сывороток. Он позволяет получить предварительный ответ через 1 - 2 ч. Для серологической диагностики коли-энтеритов начиная с третьего-пятого дня заболевания применяют реакцию непрямой гемагглютинации. Положительным ответом считают нарастание титра антител в динамике заболевания. Для обнаружения фактора адгезии ЭПКП можно проводить изучение прикрепления культур микроорганизмов к клеткам линии HEp-2 и исследования с помощью ДНК-зондов, но они доступны лишь некоторым лабораториям. При лабораторной диагностике инфекций ЭТКПпроводят обнаружение энтеротоксинов. В качестве стандартных методов обнаружения термолабильного энтеротоксина (ТЛТ) приняты исследования на культуре клеток надпочечников мыши и яичников китайских хомячков, но к токсину чувствительны и другие линии клеток, в том числе и клетки почек обезьян Vero. Добавление клеток к надосадку культуры, содержащей ТЛТ или холерный токсин, приводит к морфологической реакции, которая может быть выявлена при микроскопии. Реакция может быть расценена как стимулирующая или «цитотоническая», в отличие от цитотоксического эффекта надосадка ВТКП на клетки Vero. Для обнаружения ТЛТ доступен также широкий набор иммунологических методов, включая иммуноферментный анализ и твердофазный радиоиммунный анализ. Многие энтеротоксигенные штаммы Esch. coli продуцируют только термостабильный энтеротоксин, и важно включать исследования на образование ТСТ при любом исследовании на энтеротоксигенность. К сожалению, обычные тесты трудоемки и требуют длительного времени. Впоследствии стал доступным ИФА с моноклональными антителами, специфичными к ТСТ. Были разработаны методы генных радиоизотопных или биотиновых зондов для выявления ТСТ и ТЛТ в пробах испражнений, пищевых продуктов или воды, содержащих ЭТКП. Оригинальный тест на энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) – глазной тест на морских свинках. Микроорганизмы вводят в коньюнктивальный мешок морских свинок и наблюдают в течение 7 дней развитие коньюнктивита. Можно использовать также метод культуры клеток, в котором к монослою клеток HEp-2 или HeLa добавляют суспензии микроорганизмов. После соответствующего времени клетки тщательно исследуются на присутствие внутриклеточных организмов. Содержание ВТКП в микрофлоре фекалий может быть незначительным, часто – менее 1 %, так, что выбор и исследование отдельных колоний не всегда могут обнаружить присутствие ВТКП. Были разработаны ДНК-зонды на гены ВТ1 и ВТ2, и при использовании таких зондов в тестах гибридизации, проверяют несколько сотен колоний из каждой пробы фекалий, что дает значительное увеличение в чувствительности. В то время как 95 % Esch. coli ферментируют сорбит, ВТКП О157 не расщепляют сорбит через 24 ч, и это свойство используется для их выявления, например, применением например сорбитол-МакКонки агара для первичного культивирования с последующей реакцией агглютинации иммунной сывороткой против О157. Образование Веро-токсина подтверждают, исследуя цитотоксический эффект штаммов на клетках Vero. Подтверждение инфекции ВТКП может быть также получено выявлением нарастания титров ВТ-нейтрализующих антител или или антител против липополисахарида О157 в сыворотках больных Лабораторная диагностика дизентерии. Успех лабораторного исследования во многом зависит от правильности взятия испражнений и посева их на элективно-дифференциальную среду у постели больного с последующей отправкой чашек в лабораторию. В условиях стационара испражнения собирают на поверхности бумажной тарелки или салфетки, которые вкладывают в судно, предварительно промытое проточной водой или, лучше, кипятком, высушенное и не содержащее дезинфицирующих веществ. Наилучшим способом является взятие фекалий тампоном непосредственно из прямой кишки. Посев производят немедленно после получения испражнений. Отбирают частицы кала, содержащие гной и слизь, и засевают тампоном на чашки со средой Плоскирева, которые помещают в термостат при 37°С на сутки. Выделенную чистую культуру идентифицируют по биохимическим и серологическим данным.
РЕКОМЕНДОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА 1. Пяткін К. Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія. - К : Высшая школа, 1992. - 432 с. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. - М : Медицина, 1983. - 312 с. 2. Борисов Л.Б., Козьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / под ред. Борисова Л.Б. – Г. : Медицина, 1993. – 232 с. 3. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник под ред. А.А.Воробьева. – М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 691 с. 4. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология /ред. Л.Б.Борисов, А.М.Смирнова. - М: Медицина, 1994. - 528 c.
Лекция 19. САЛМОНЕЛЛЫ Род Salmonella назван именем американского исследователя Д.Сальмона, который вместе со Смитом в 1885 г описал первого представителя рода - Salmonella choleraesuis. Род сальмонелл включает 65 групп (около 2000 сероваров) Сальмонеллы паразитируют в организме домашних и диких животных, птиц, рыб, рептилий, некоторые из них являются патогенными и для человека. Среди них - возбудители брюшного тифа и паратифов и около 700 сероваров, вызывающих у людей и животных гастроэнтероколит - сальмонеллез. Международным номенклатурным комитетом род сальмонелл подразделен на четыре подрода. Подрод I - S. kauffmanni - включает большую часть патогенных для человека сальмонелл серологических групп А, В, С, D, Е. Подрод II - S. salamae - отличается от первого подрода способностью разжижать желатин и ферментировать малонит натрия. Подрод III - S. arizonae ферментирует (медленно) лактозу и индифферентен к дульциту, обнаруживается у птиц, рептилий и млекопитающих. У человека S. arizonae выделен при лихорадочных состояниях с явлениями диареи и гастроэнтерита, эти заболевания за последние годы значительно участились. К IV подроду - S houtenau - отнесены атипичные в биохимическом отношении сальмонеллы II подрода, они ферментируют салицин и растут в присутствии цианида калия, к которому чувствительны все патогенные для человека энтеробактерии. ![]() ![]() ЧТО И КАК ПИСАЛИ О МОДЕ В ЖУРНАЛАХ НАЧАЛА XX ВЕКА Первый номер журнала «Аполлон» за 1909 г. начинался, по сути, с программного заявления редакции журнала... ![]() Что будет с Землей, если ось ее сместится на 6666 км? Что будет с Землей? - задался я вопросом... ![]() Живите по правилу: МАЛО ЛИ ЧТО НА СВЕТЕ СУЩЕСТВУЕТ? Я неслучайно подчеркиваю, что место в голове ограничено, а информации вокруг много, и что ваше право... ![]() Что способствует осуществлению желаний? Стопроцентная, непоколебимая уверенность в своем... Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
|