Сдам Сам

ПОЛЕЗНОЕ


КАТЕГОРИИ







Гормональные методы исследования на беременность





При беременности в значительной мере изменяется гормо­нальное зеркало организма животных. В большей степени эти изменения происходят у кобыл и приматов. Так, по исследова­ниям Цондека и Ашгейма в крови и моче беременных обезьян обнаружено много половых гормонов. Это дало повод исполь­зовать изменения в гормональном статусе у человека для ди­агностики беременности.

Гормональная диагностика беременности в ветеринарии разработана только у лошадей по пролану и фолликулостерону. К 45-му дню со дня оплодотворения количество пролана доходит до 26 000 МЕ, а к 90 дню — до 100.000 — 200.000 МЕ. Фолликулина накапливается в моче к 3 - 4 месяцам беремен­ности от 28.000 до 1.000.000 МЕ.

У беременных коров и свиней, по данным одних исследова­телей, гонадотропины отсутствуют как в крови, так и в моче,а по данным других, наоборот, гонадотропины в крови бере­менных бывают в большом количестве. Фолликулостерону этих животных обнаруживается в весьма ограниченных коли­чествах. Так, у коров фолликулостерона в первую половину беременности бывает всего 7-8 МЕ, а во вторую — 400 – 800 МЕ.

У супоросных свиней фолликулостерон обнаруживается в промежутке между 7—8 днями и 20—22 днями в количестве 300—500 МЕ. С 22-го по 35-й день — в пределах 1.000— 3.000 МЕ. С 35-го по 75-й день он не обнаруживается, появля­ется так называемый фолликулостероновый провал. Со вто­рой половины и до конца беременности количество фоллику­лостерона постепенно увеличивается до 1.000 МЕ в 1 л мочи.

Количество или доза натуральных гормонов определяется мышиными, крысиными или кроличьими единицами; доза синтетических гормонов определяется в миллиграммах.

Под мышиной единицей понимают минимальное количество фолликулостймулирующего или эстрогенного гормонов, которое способно вызывать сдвиги в половой функции, т. е. обусловить половой цикл у 50% инфантильных мышей. Дозы, вызывающие такие же изменения у крысы и крольчихи, назы­ваются крысиной или кроличьей единицами.



Реакция Холла и Харта. Реакция основана на выявлении пролана в крови жеребых кобыл в промежутках между 45 и 120 днями жеребости.

Методика. Сыворотку инъецируют инфантильным (и возрасте 20—28 дней и весом 6—8 г) мышам: первой 0,5 мл, второй — 0,3 и третьей — 0,1 мл два раза в сутки в течение 3 дней. Всего 6 инъекций. Спустя 4—5 дней берут платиновой петлей слизь со слизистой оболочки влагалища (но не пред­дверия) и делают мазки. При жеребости в мазках обнаружива­ются в большом количестве безъядерные, эпителиальные клетки («чешуйки»). Отсутствие «чешуек» — отрицательная реакция. При неясной картине производят убой мышки.

Положительной реакцией считается увеличение рогов матки у исследуемых мышей по сравнению с контрольными, наличие зрелых и заполненных кровью фолликулов или жел­тых тел.

Убой подопытных животных осуществляется через 100 часов.

Реакция Фридмана и Шнейдера.Тестообъектом служит половозрелая крольчиха, весом 900—1200 г. Ей инъецируют в ушную вену 10 мл сыворотки крови исследуемой кобылы. Учет реакции производится через 36-48 часов. Для чтения реакции крольчихе производят лапаротомию. При осмотре яичников крольчихи обнаруживают кровоизлияния на месте лопнувших фолликулов или кровоизлияния в полость фолликулов. После чтения реакции брюшная полость зашивается, а через 2-3 недели крольчиха пригодна для повторной пробы.

Реакция Цондека и Ашгейма.Реакция основана на выяв­лении в моче фолликулостерона, начиная с 3 месяцев бере­менности. Перед, инъекцией под кожу инфантильным или каст­рированным мышам мочи ее фильтруют через бумажный фильтр и подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции (по лакмусовой бумажке).

Для повышения действия фолликулостерона и понижения токсичности мочу желательно дополнительно обработать эфи­ром. К моче добавляют равное количество эфира и тщательно взбалтывают. После того как эфир слили, мочу оставляют от­крытой до исчезновения эфирного запаха. Для реакции берут 4-6 кастрированных мышек не раньше чем через 2 недели после операции. Подопытным мышкам вводят в течение 3 дней по 2 раза в сутки мочу исследуемого животного в сле­дующих дозах:

Кастрированным: Инфантильным:

1-й 0,3 мл цельной мочи 1-й 0,2 мл цельной мочи

2-й 0,2 » » » 2-й 0,1 » » »

3-й 0,1 » » » 3-й 0,1 » » »

4-й 0,1 » мочи, разбав- 4-й 0,1 » мочи, разбав-­

ленной водой в 2 раза ленной водой в 2 раза

Через 80—100 часов по 3 раза в день платиновой петлей получают из влагалища слизь и этой же петлей делают мазок на стекле. После высушивания на воздухе, мазки фиксируют спиртом и окрашивают по Гимза. Большое количество чешуек указывает на течку у мышки, а следовательно, на беремен­ность у лошади. Отсутствие или ограниченное количество че­шуек — отрицательная реакция. В сомнительных случаях про­изводят забой и вскрытие мышек. Увеличение рогов матки в 2 раза и больше считается положительной реакцией.

Реакция Бабичева.Реакция основана на определении фол-ликулостерона в моче кобыл, начиная с 3-месячной беремен­ности.

Методика. К 15 мл мочи добавляют 1 мл серной кисло­ты. Колбу с мочой кипятят 15 минут на водяной бане. После охлаждения на мочу наслаивают 3-4 мл бензола так, чтобы он не смешивался с ней, и осторожно вращают колбу 70 раз. Затем пипеткой бензол сливают в пробирку и добавляют в нее 1 мл концентрированной серной кислоты. Пробирку ставят на 2 минуты в водяную баню. После охлаждения смотрят на окраску слоя серной кислоты в отраженных лучах на темном фоне. Зеленоватая флюоресценция указывает на наличие фолликулостерона, а следовательно, и беременность. Коричневое окрашивание — отрицательная реакция. Реакция простая и точная.

Лабораторная диагностика беременности у коров практически не раз­работана в таких масштабах, чтобы ее можно было использовать в произ­водстве.

Методы диагностики, основанные на феномене кристаллизации, удель­ном весе шеечной слизи и обнаружении Сахаров при кипячении слизи с ра­створам едкого калия и с дистиллированной водой, дают большие ошибки.

Электрометрический метод Ф. И. Осташко и биологический метод на лягушках (самцах) М. Н. Тростянецкой еще не апробированы широкой прак­тикой.

Беременность сопровождается рядом изменений в половой, эндокринной, иммунной и других системах организма; эти изменения можно обнаружить лабораторными тестами. Наибольшую известность получили гормональные методы. К ним относятся:

1. Определение уровня прогестерона в крови или молоке коров на21 – 24-е сутки, свиней – на 18-20-е, овец – на 18-е сутки после осеменения. Метод основан на том, что при отсутствии беременности к указанному сроку содержание прогестерона снижается в связи с рас­сасыванием желтых тел, тогда как' у беремен­ных остается относительно высоким.

Содержание прогестерона можно определить быстрым методом, для чего используют тестовые трубочки. В нее вносят 3 капли мо­лока; при высоком уровне прогестерона полу­чают яркое голубое окрашивание.

В условиях специализированной лаборато­рии уровень гормона определяют радиоизотоп­ным методом. Положительный диагноз ставят при содержании прогестерона 11 ng/мл, отрица­тельный — 2 ng/мл и ниже. Точность отрица­тельных диагнозов составляет 96-97%, положи­тельных — 75-82%. Диагностические ошибки возникают из-за увеличения продолжительнос­ти или выпадения половых циклов, персистенции желтого тела, резорбции зародыша.

2. Индукция течки у коров инъекцией малых доз эстрогенов (3 – 5 мг стильбестрола или ком­бинации стильбестрола с тестостероном) на 17-24-е или 38-42-е сутки после осеменения. При отсутствии стельности в течение 5 суток после инъекции препарата проявляется ста­дия возбуждения полового цикла, тогда как стельные коровы на такую дозу препарата не реагируют.

3. В ФРГ для диагностики супоросности был предложен препарат, содержащий в дозе 400 ИЕ сывороточного гонадотропина и 200 ИЕ хорионгонадотропина. У несупоросных свино­маток на 4-7-е сутки после инъекции препа­рата наступает полноценная стадия возбужде­ния полового цикла и ее можно повторно осеменять. При наличии супоросности он не оказывает вредного действия на свиноматку и плоды.

4. Обнаружение в крови сывороточных гонадотропинов биологическим путем. Метод пригоден лишь для диагностики жеребости.

Иммунологические методы.К настоящему времени определилось два подхода: 1-определение наличия эмбриоантител в организме самки реакциейглютинации; 2-обнаружение иммунодепрессоров которые циркулируют в крови беременной самки; от образуются в зародыше и подавляют материнский иммунный ответ. Иммунодепрессорный фактор (ранний фактор беременности) обнаруживается в материнской крови с 15-х по 38-е сутки после осеменения.

Иммунологические методы не получили широкого практического применения в животноводство ввиду их сложности либо низкой достоверности результатов.

Гистовагинальный метод.Предназначен диагностики беременности у овец и свиней. Метод основан на том, что во время полового цикла слизистая

оболочка передней части влагалища покрыта рядным плоским эпителием (10-12 слоев). В поверхностных слоях эпителий чешуйчатый, в полигональный. С наступлением беременности ходит прогрессирующее уменьшение числа слоев (до 2-3); эпителий в этот период представлен кубически и цилиндрическими клетками с четко выраженным хроматином.

Материал для гистологического исследования берут посредством биопсии из передней части влагалища. Метод обеспечивает почти 100% - ное совпадение результатов с фактическими опоросами (окотами). Однако в условиях производства он не может найти ши­рокое применение из-за чрезмерно больших затрат труда при взятии биопсийного материала и проведе­нии гистологических исследований.

 

Назовите диагностические критерии клинической и биологической смерти.

 

 

Составил преподаватель: _____________ Кувачева Г.А.

«09» января 2017 г. (подпись)









Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:


©2015- 2019 zdamsam.ru Размещенные материалы защищены законодательством РФ.