ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ ВИРУСОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ДИАГНОСТИКИ.

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ

СТРОЕНИЕ КУРИНОГО ЭМБРИОНА.

Обозначьте на рисунке основные структурные элементы куриного эмбриона.

Феномены, позволяющие выявить вирус в курином эмбрионе.

1_________________________________________________________________

2_________________________________________________________________

3_________________________________________________________________

4_________________________________________________________________

КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК.

1. ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫЕ -фибробласты куриного эмбриона (ФК), фибробласты эмбриона человека (ФЭЧ), клетки почки эмбриона человека и т.д.

2. ПОЛУПЕРЕВИВАЕМЫЕ -получают из легкого или мышечной ткани эмбриона человека.

3. ПЕРЕВИВАЕМЫЕ -HeLa (карцинома шейки матки), НЕр-2 (карцинома гортани человека), BHK-21 (почки хомячка) и др.

КОНТРОЛЬНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ РАБОТЕ С КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК

1. Бактериологический контроль;

2. Контроль на вирусологическую стерильность;

3. Цитогенетический контроль (количественная и качественная характеристика хромосомного аппарата).

ФЕНОМЕНЫ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ВЫЯВИТЬ ВИРУС В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

I. ЦПЭ (ЦПД) - цитопатический эффект (действие).

Нормальные клетки

HeLa ФЭЧ

Цитопатическое действие:

II. Цветная проба Солка.

Принцип метода: рост культуры клеток в питательной сре­де сопровождается накоплением кислых продуктов метаболизма и изменением рН, что визуально проявляется изменением цвета индикатора. При размножении ряда вирусов клетки погибают, накопления продуктов метаболизма и изменения цвета индикато­ра не происходит.

III. Феномен гемадсорбции.

IV. Образование бляшек (феномен Дюльбекко).

V. Феномен интерференции.

Принцип метода: феномен интерференции используют для обнаружения вирусов, не дающих отчетливого ЦПД вкультуре клеток. Культуру клеток заражают исследуемым материалом и затем вносят индикаторный вирус (ВВС - вирус везикулярного стоматита). При наличии в исследуемом материале вируса ЦПД индикаторного вируса будет отсутствовать (клетка «занята» искомым вирусом), что оценивается визуально при малом увели­чении микроскопа.

VI. Метод флюоресцирующих антител.

Принцип метода:______________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ ВИРУСОВ (ТИТРОВАНИЕ).

I этап. Разведение вируссодержащего материала в питательной среде или физиологическом растворе.

II этап. Мерный перенос материала из разведений в:

- пробирки с культурой клеток;

- в куриный.эмбрион;

- в организм животного;

- добавление эритроцитов или других ингредиентов.

III этап. Учет результатов: титр вируса – максимальное разведение вируссодержащёго материала, в котором еще наблю­дается ожидаемый феномен (ЦПД, РГА, гибель животного и т.д.). Титр соответствует 1 единице. Титрование необходимо для выбора рабочей дозы вируса, которая вдальнейшем будет использоваться для постановки иммунологических реакций с целью идентификации вируса.

ОБЩАЯ СХЕМА ИДЕНТИФИКАЦИИ (СЕРОТИПИРОВАНИЯ) ВЫДЕЛЕННОГО ВИРУСА.

I этап. Выделенный вирус в рабочей дозе + диагностичес­кая противовирусная сыворотка в рабочем разведении → кон­такт при комнатной температуре или при 37 градусах в течение 1 часа.

II этап. Перенос смеси выделенного вируса с сывороткой в:

- культуру клеток;

- в организм животного;

- вкуриный эмбрион;

- добавление эритроцитов или других ингредиентов.

III этап. Учет результатов (время определяется избранной моделью для выделения и идентификации вируса я особенностями вируса). Вид (тип) выделенного вируса определяют в соот­ветствии с нейтрализующим эффектом одной из типоспецифических сывороток, т.е. с отсутствием феномена взаимодействия вируса с культурой клеток там, где сыворотка соответствует виду (типу) выделенного вируса.

ЭТИОЛОГИЯ ОРВИ

Живите по правилу: МАЛО ЛИ ЧТО НА СВЕТЕ СУЩЕСТВУЕТ? Я неслучайно подчеркиваю, что место в голове ограничено, а информации вокруг много, и что ваше право...

Система охраняемых территорий в США Изучение особо охраняемых природных территорий(ООПТ) США представляет особый интерес по многим причинам...

ЧТО ПРОИСХОДИТ, КОГДА МЫ ССОРИМСЯ Не понимая различий, существующих между мужчинами и женщинами, очень легко довести дело до ссоры...

Что делать, если нет взаимности? А теперь спустимся с небес на землю. Приземлились? Продолжаем разговор...

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте: