|
Этапы бактериологического исследования
| 1. Забор материала:
1) выбор материала определяется клинической картиной:
при заболеваниях верхних дыхательных путей – слизь из носа и зева, мокрота, ликвор;
при заболеваниях желудочно-кишечного тракта – испражнения, промывные воды, рвотные массы;
при генерализованных формах – кровь;
2) материал берут до начала лечения;
3) в разные стадии заболевания берут разный материал
| | 2. Транспортировка:
1) необходимы специальные транспортные среды,
2) важно соблюдать условия транспортировки
| | 3. Посев материала на плотные питательные среды для получения изолированных колоний (см. табл. 54, 55)
| | 4. Изучение культуральных признаков (см. табл. 56)
|
Окончание табл. 53
| 5. Изучение морфологических и тинкториальных (отношение к окраске) признаков = приготовление мазка и окраска по Граму
| | 6. Выделение чистой культуры и накопление биомассы = посев на скошенный столбик элективной питательной среды
| | 7. Проверка чистоты культуры = мазок, окраска по Граму
| | 8. Идентификация выделенной чистой культуры = изучение биохимических и серологических свойств бактерий (см. табл. 57)
|
Таблица 54
Особенности выделения чистых культур аэробных бактерий
| 1. Механическое разобщение клеток:
а) метод Коха: готовят десятикратные разведения материала в хлориде натрия, из каждого разведения 1 петлю вносят в пробирку с агаром (400) и выливают его в чашку Петри;
б) метод Дригальского: 1 петлю материала наносят на поверхность агара в чашку Петри и растирают шпателем, затем, не прожигая его, растирают по поверхности агара второй, а затем третьей чашки и т.д;
в) механическое разобщение петлей;
г) количественный метод Голда: 1 мл жидкого или 1 г твердого материала вносят в 9 мл NaCl, затем 1 петлю материала наносят на чашку = делают 40 штрихов (сектор А), задевая штрихи сектора А, проводят 4 штриха (1-й сектор), аналогично засевают 2-й и 3-й секторы
| | 2. Предварительная обработка материала с помощью физических или химических факторов.
Например: 1) неспорообразующие бактерии уничтожают прогреванием при 80 0С 20 мин, споры при этом сохраняются;
2) для выделения микобактерий материал обрабатывают кислотой, при этом сопутствующая флора погибает
| | 3. Избирательное подавление сопутствующих бактерий физическими или химическими факторами во время инкубации посевов.
Например: для выделений иерсиний чумы посевы инкубируют при Т=5 0С
| Окончание табл. 54
| 4. Заражение чувствительных животных = для выделения возбудителя чумы из трупов грызунов
| | 5. Использование биологических свойств бактерий. Например: метод Шукевича для выделения протея (ползучий рост)
|
Таблица 55
Особенности выделения чистых культур анаэробных бактерий
| 1. Применение специальных сред = Китта – Тароцци (питательный бульон, глюкоза, 0,15% агара, кусочек мяса, рН=7,4)
| | 2. Механическая защита = сверху наливают вазелиновое масло
| | 3. Культивирование в анаэростатах
| | 4. Культивирование в толще питательной среды по Вейнбергу: 1 петлю материала вносят в бульон, оттуда пастеровской пипеткой переносят в агар (450) и готовят 10-тикратные разведения
| | 5. Метод Виньяла – Вейона = культивирование в запаянных ампулах или пастеровских пипетках
| | 6. Посев в высокий столбик питательной среды: 10-15 мл плотной среды, материал засевают уколом
| | 7. Химическая защита: в пробирку с питательной средой вносят химические вещества = поглотители кислорода: щелочной раствор пирогаллола, гидрокарбонат натрия и гидросульфит натрия
| | 8. Биологический метод Фортнера: на чашку с питательной средой засевают одновременно аэробы и анаэробы, после чего чашку герметизируют парафином
| | Ход выделения:
1) материал первоначально засевают на среды обогащения = в 2 пробирки со средой Китта – Тароцци, одну – выдерживают при 80 0С 30 мин для уничтожения вегетативных форм и сопутствующей флоры, вторую – нет. Обе пробирки затем инкубируют в термостате;
2) делают пересев из среды Китта – Тароцци по методу Цейсслера: материал петлей наносят на 1 чашку и растирают шпателем последовательно в 1, 2 и 3-й чашке...;
3) выделяют чистую культуру и идентифицируют
| Таблица 56
Культуральные признаки бактерий
(характер колоний на плотной питательной среде)
| Величина
| Крупные, средние, мелкие
| | Форма
| Круглые, овальные, розеткообразные, напоминающие гриву льва, яичницу и т.п.
| | Цвет
| Белые, желтые, красные, бесцветные
| | Консистенция
| Сухие, влажные, слизистые
| | Поверхность
| Гладкая, морщинистая, плоская, выпуклая
| | Край
| Ровный, волнистый, фестончатый
| | Структура
| Аморфная, зернистая, волокнистая
|
Таблица 57
Изучение биохимических признаков бактерий
(«пестрый ряд»)
| Определение сахаролитических ферментов = посев на «пестрый ряд» (среды Гисса – включают в себя углевод и индикатор Андреде). Для сбора газообразных продуктов в пробирки помещают поплавок
| | Короткий «пестрый ряд»включает углеводы: глюкоза, лактоза, мальтоза, сахароза, маннит
| Длинный «пестрый ряд»включает те же углеводы, что и короткий ряд: глюкоза, лактоза, мальтоза, сахароза, маннит и дополнительно в его состав входят: 1) моносахариды: арабиноза, ксилоза, рамноза, галактоза; 2) полисахариды: инулин, крахмал, гликоген; 3) спирты: глицерин, дульцит, инозит
| | Учет результатов:
1. Если цвет среды изменился, бактерии ферментируют этот углевод до кислых продуктов (ставят в таблице букву К).
2. Если наряду с изменением цвета среды в поплавке обнаруживается газ, бактерии ферментируют этот углевод до кислоты и газа (ставят – КГ).
3. Если цвет среды не изменился, бактерии не ферментируют этот углевод
| Окончание табл. 57
| Определение протеолитических ферментов = посев бактерий уколом в столбик 10-20% желатины и пептонную воду (в пробирку к пробке прикрепляют индикаторные бумажки на индол, сероводород, аммиак). Для обнаружения каталазы на стекло наносят культуру и каплю 1-3% р-ра Н2О2
| | Учет результатов:
1. При наличии протеолитических ферментов бактерии разжижают желатин, образуя «воронку» или «елочку».
2. При образовании газообразных продуктов разложения пептона бумажки меняют цвет:
бумажка на аммиак – синеет,
бумажка на сероводород - чернеет,
бумажка на индол – розовеет.
|
Таблица 58
Протокол выделения чистой культуры и идентификации бактерий
| Морфология бактерий
|
| | Окраска по Граму и другими методами
|
| | Характер роста (культуральные признаки)
| Колонии на плотной среде
|
| | Рост на жидкой среде
|
| |
Биохимические
признаки
|
ферментация
| глюкозы
|
| | лактозы
|
| | сахарозы
|
| | мальтозы
|
| | маннита
|
| |
образование
| индола
|
| | сероводорода
|
| | аммиака
|
| | каталазы
|
| | Наименование рода и вида культуры
| | | | | | | | Таблица 59
Особенности культивирования риккетсий и хламидий
| Риккетсии и хламидии = внутриклеточные паразиты – на питательных средах не растут
| | Риккетсии культивируют в:
1) куриных эмбрионах,
2) культурах клеток,
3) организме чувствительных животных,
4) организме переносчиков болезней: вшей, блох, клещей
| Хламидии культивируют в:
1) куриных эмбрионах,
2) культурах клеток,
3) организме чувствительных животных
|
СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2002. 736 с.
2. Борисов Л.Б. с соавт. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. М.: Медицина, 1993. 240 с.
3. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. А.А. Воробьева. М.: Медицинское информационное агентство, 2008. 464 с.
4. Райкис Б. Н. с соавт. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией (в графическом изображении). М.: Триада-Х, 2002. 352 с.
ОГЛАВЛЕНИЕ
Принципы классификации микроорганизмов……..……………4
Систематика и морфология болезнетворных бактерий………..7
Микроскопические методы изучения морфологии бактерий…18
Физиология болезнетворных бактерий…..……………………..26
Принципы и методы культивирования бактерий.
Бактериологическое исследование…..………………………….35
Список рекомендуемой литературы.……………………………46
ОСНОВЫ ОБЩЕЙ БАКТЕРИОЛОГИИ (В ТАБЛИЦАХ)
Методические указания
Редактор З.М. Порфирьева
Подписано в печать---.---.16. Форма 60Х84/16. Бумага газетная. Гарнитура Times. Печать оперативная. Усл. печ.л. 2,79.
Уч.-изд. л. 2,13. Тираж 500 экз. Заказ № ____.
Чувашский государственный университет
Типография университета
428015 Чебоксары, Московский просп., 15
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
|
