Приготовление микропрепаратов и окраска по Граму, Бури – Гинсу, Нейссеру, Цилю – Нильсену, простым способом. Микрокопирование в иммерсионной системе.

Приготовление микропрепаратов и окраска по Граму, Бури – Гинсу, Нейссеру, Цилю – Нильсену, простым способом. Микрокопирование в иммерсионной системе.

Метод Грама. 1) на фильт бумагу карб р-р генцианвиолет-1-2 м; сним бумагу, 2. раствор Люголя (1 м), обесцв спирт 96% (30сек). П. 4)Фуксин (1-2)

Окрака по Бури-Гинсу. Обнаружение капсул бактерий. В каплю туши вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметном стеклу. Мазок высушивают, фиксируют. окрашивают карболов фукчином 3-5мин. Промыв водой, высушивают. На темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокрг красных бактерий.

Окраска по Нейссеру. При этом методе гранулы валютина- сине-черные, а бактерия- желтая. При этом мазок: 1) окрашивают 1 мин уксуснокислым метиленовым синим, сливают краситель, промывают водой, 2) наливают раствор Люголя на 30 сек.3) окрашивают 1-3 мин везувином, промывают водой и высушивают.

Окраска по Цилю-Нильсену. Применяется для выявления кислото- и спиртоустойчивых, споры. 1) полоской фильтрованной бумаги карб фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров, подливая краситель. Далее бумагу снимают, обрабатывают 5% раствором серной кислоты и промывают водой. 3. На мазок наливают раствор метиленового синего, спустя 3-5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой. В светло-синий цвет.

2. Посев исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды. Культуральные свойства микроорганизмов.

Методы культивирования анаэробов.

I этап — обогащение на среде Китт — Тароцци, предварительно прокипячен­ной в течение 30 минут для удаления пузырьков воздуха. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются. II этап — получение изолированных колоний На средах Китт — Тароцци обнаружи­вается помутнение с пузырьками газа. Выделение чистой культуры проводится по одному из следующих методов:

А) по Цейсслеру — каплю материала со среды Китт — Тароцци засевают в чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же шпате­лем производят посев во второй и третьей чашках;

Б) по Вейнбергу: каплю материала со среды Китт — Тароцци переносят в растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем под струю холл воды и инкубируют в термостате.

Ш этап — выделение чистой куль­туры на среде Китт — Тароцци.

Определение ОМЧ воздуха по методу Коха.

Седиминтационный метод. чашку Петри с питательным агаром оставляют открытыми в течение 5 мин, после чего посевы инкубируют в термостате при 37°С 2 сут. Результаты оценивают по суммарному числу колоний.на 100см2 за 5 мин – 10 л возд

Аспирационный метод - Посев воздуха осуществляется с помощью прибора Кротова

Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просачивается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.

Стерилизация и дезинфекция лабораторной посуды.

В микробиологической практике применяют различные дезинфицирующие вещества: 0,2% раствор жавель-солида, 3-5% растворы фенола, 5-10% растворы лизола, 1-5% растворы хлорамина, 3-6% растворы перекиси водорода, 1-5% растворы формалина, растворы сулемы в разведении 1:1000 (0,1%), 70% спирт и др.

Загрязненные патологическим материалом или культурами микроорганизмов пипетки, стеклянные шпатели, предметные и покровные стекла опускают на сутки в стеклянные банки с 0,2% раствор жавель-солида, 3% раствором фенола или перекиси водорода. Препаровальные иглы, бактериальные петли после употребления немедленно прокаливают на огне.

Поверхность рабочего стола протирают кусочком ваты, смоченным 3% раствором фенола. Руки дезинфицируют 1% раствором хлорамина.

Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутылки, матрацы, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажный колпачек. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-5 штук или в пеналах.Пастеровские пипетки по 3-5-10-15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180?С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.

б) в автоклаве при давлении 1 атм. В течение 20-30 минут

Определение чувствительности микроорганизма к антибиотикам методом Стандартных дисков.

культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри.

Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чув­ствительности к антибиотикам.

Определение чувствительности микроорганизма к антибиотикам методом серийных разведений

Осн р-р АБ готовят с пом буф р-ра или спец р-ля. Серийные разведения препарата готовят в пробирках, содерж 1 мл мясо-пепт бульона. В 1-ю проб вносят 1 мл исходн р-ля,после чего готовят серию разведений препарата. В кажд вносят 0,1 мл бакт сусп. Готовят контроли (мпб+сусп, мпб_АБ). Инкубир. Отсутствие помутнения – задержка роста в присутств данной конц аб

Ориентировочная реакция агглютинации (техника постановки, учёт результатов).

ОРА выполняют перед постановкой развернутой реакции для того, чтобы получить предварительное представление о выделенном виде или сероваре бактерий

Ставят при комнатной температуре на предметных стеклах. Для этого пастеровской пипеткой наносят на стекла раздельно друг от друга капли сыворотки в небольших разведениях(1:10-1:20) и две капли 0,5% раствора натрия хлорида(Контроль). В каждую каплю(за исключением контрольной) вносят подозрительные колонии, снятые с поверхности плотной питательной среды.Перемешивают до помутнения. Результаты реакции учитывают через 5-10 минут. При положительной реакции в капле с сывороткой появляются крупные ли мелкие хлопья, при отрицательной- жидкость остается равномерной мутной.

Приготовление микропрепаратов и окраска по Граму, Бури – Гинсу, Нейссеру, Цилю – Нильсену, простым способом. Микрокопирование в иммерсионной системе.

Метод Грама. 1) на фильт бумагу карб р-р генцианвиолет-1-2 м; сним бумагу, 2. раствор Люголя (1 м), обесцв спирт 96% (30сек). П. 4)Фуксин (1-2)

Окрака по Бури-Гинсу. Обнаружение капсул бактерий. В каплю туши вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметном стеклу. Мазок высушивают, фиксируют. окрашивают карболов фукчином 3-5мин. Промыв водой, высушивают. На темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокрг красных бактерий.

Окраска по Нейссеру. При этом методе гранулы валютина- сине-черные, а бактерия- желтая. При этом мазок: 1) окрашивают 1 мин уксуснокислым метиленовым синим, сливают краситель, промывают водой, 2) наливают раствор Люголя на 30 сек.3) окрашивают 1-3 мин везувином, промывают водой и высушивают.

Окраска по Цилю-Нильсену. Применяется для выявления кислото- и спиртоустойчивых, споры. 1) полоской фильтрованной бумаги карб фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров, подливая краситель. Далее бумагу снимают, обрабатывают 5% раствором серной кислоты и промывают водой. 3. На мазок наливают раствор метиленового синего, спустя 3-5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой. В светло-синий цвет.

2. Посев исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды. Культуральные свойства микроорганизмов.

ЧТО И КАК ПИСАЛИ О МОДЕ В ЖУРНАЛАХ НАЧАЛА XX ВЕКА Первый номер журнала «Аполлон» за 1909 г. начинался, по сути, с программного заявления редакции журнала...

ЧТО ТАКОЕ УВЕРЕННОЕ ПОВЕДЕНИЕ В МЕЖЛИЧНОСТНЫХ ОТНОШЕНИЯХ? Исторически существует три основных модели различий, существующих между...

ЧТО ПРОИСХОДИТ ВО ВЗРОСЛОЙ ЖИЗНИ? Если вы все еще «неправильно» связаны с матерью, вы избегаете отделения и независимого взрослого существования...

Система охраняемых территорий в США Изучение особо охраняемых природных территорий(ООПТ) США представляет особый интерес по многим причинам...

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте: