Сдам Сам

ПОЛЕЗНОЕ


КАТЕГОРИИ







ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ ВИРУСОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ДИАГНОСТИКИ.





КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ

СТРОЕНИЕ КУРИНОГО ЭМБРИОНА.

Обозначьте на рисунке основные структурные элементы куриного эмбриона.

 

 

Феномены, позволяющие выявить вирус в курином эмбрионе.

 

1_________________________________________________________________

 

2_________________________________________________________________

 

3_________________________________________________________________

 

4_________________________________________________________________

 

КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК.

 

1. ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫЕ -фибробласты куриного эмбриона (ФК), фибробласты эмбриона человека (ФЭЧ), клетки почки эмбриона человека и т.д.

2. ПОЛУПЕРЕВИВАЕМЫЕ -получают из легкого или мышечной ткани эмбриона человека.

3. ПЕРЕВИВАЕМЫЕ -HeLa (карцинома шейки матки), НЕр-2 (карцинома гортани человека), BHK-21 (почки хомячка) и др.

КОНТРОЛЬНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ РАБОТЕ С КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК

1. Бактериологический контроль;

2. Контроль на вирусологическую стерильность;

3. Цитогенетический контроль (количественная и качественная характеристика хромосомного аппарата).

 

ФЕНОМЕНЫ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ВЫЯВИТЬ ВИРУС В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

I. ЦПЭ (ЦПД) - цитопатический эффект (действие).

Нормальные клетки

HeLa ФЭЧ


Цитопатическое действие:

 

Вируса кори (HeLa) Аденовируса (HeLa) Вируса оспы (HeLa) Полиовируса (ФЭЧ)
       

II. Цветная проба Солка.

Принцип метода: рост культуры клеток в питательной сре­де сопровождается накоплением кислых продуктов метаболизма и изменением рН, что визуально проявляется изменением цвета индикатора. При размножении ряда вирусов клетки погибают, накопления продуктов метаболизма и изменения цвета индикато­ра не происходит.

 

Вирус присутствует   Вирус отсутствует
       
до инкубации после инкубации до инкубации после инкубации

III. Феномен гемадсорбции.



Принцип метода: контакт пораженных вирусом клеток с эритроцитами приводит к адсорб­ции последних на клеточкой поверхности, что можно выявить при малом увеличении микроско­па. Не пораженные клетки эритроцитов не адсорбируют. Реакциюгемадсорбцки используют для раннего обнаружения вирусов в культуре клеток.  

IV. Образование бляшек (феномен Дюльбекко).

Принцип метода: монослой клеток после заражения вирусом заливают слоем полужидкого агара, в состав которого входят питательная среда и краситель - нейтральный красный. В тех зонах монослоя, где происходит размноже­ние вирусов, образуются группы дегенерированных клеток, которые не окрашиваются и выгля­дят на красном фоне в виде прозрачных пятен (бляшек).  

V. Феномен интерференции.

Принцип метода: феномен интерференции используют для обнаружения вирусов, не дающих отчетливого ЦПДвкультуре клеток. Культуру клеток заражают исследуемым материалом и затем вносят индикаторный вирус (ВВС - вирус везикулярного стоматита). При наличии в исследуемом материале вируса ЦПД индикаторного вируса будет отсутствовать (клетка «занята» искомым вирусом), что оценивается визуально при малом увели­чении микроскопа.

VI. Метод флюоресцирующих антител.

Принцип метода:______________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ ВИРУСОВ (ТИТРОВАНИЕ).

I этап.Разведение вируссодержащего материала в питательной среде или физиологическом растворе.

II этап. Мерный перенос материала из разведений в:

- пробирки с культурой клеток;

- в куриный .эмбрион;

- в организм животного;

- добавление эритроцитов или других ингредиентов.

III этап. Учет результатов: титр вируса – максимальное разведение вируссодержащёго материала, в котором еще наблю­дается ожидаемый феномен (ЦПД, РГА, гибель животного и т.д.). Титр соответствует 1 единице. Титрование необходимо для выбора рабочей дозы вируса, которая вдальнейшем будет использоваться для постановки иммунологических реакций с целью идентификации вируса.

 

ОБЩАЯ СХЕМА ИДЕНТИФИКАЦИИ (СЕРОТИПИРОВАНИЯ) ВЫДЕЛЕННОГО ВИРУСА.

 

I этап. Выделенный вирус в рабочей дозе + диагностичес­кая противовирусная сыворотка в рабочем разведении → кон­такт при комнатной температуре или при 37 градусах в течение 1 часа.

II этап. Перенос смеси выделенного вируса с сывороткой в:

- культуру клеток;

- в организм животного;

- вкуриный эмбрион;

- добавление эритроцитов или других ингредиентов.

III этап. Учет результатов (время определяется избранной моделью для выделения и идентификации вируса я особенностями вируса). Вид (тип) выделенного вируса определяют в соот­ветствии с нейтрализующим эффектом одной из типоспецифических сывороток, т.е. с отсутствием феномена взаимодействия вируса с культурой клеток там, где сыворотка соответствует виду (типу) выделенного вируса.

ЭТИОЛОГИЯ ОРВИ

СЕМЕЙСТВО РОД Тип НК Отличительные особенности заболевания
Ortomyxoviridae грипп А Influenzavirus   Грипп А
Грипп В  
Грипп С
Paramyxoviridae Paramyxovirus   Парагрипп
Pnemnavirus   РС инфекция
Reoviridae Reovirus    
Picornaviridae Enterovirus   ЭКХО, Коксаки-инфекция
Rhinovirus    
Coronaviridae Coronavirus    
Adenoviridae Mastoadeno-virus    

 









Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:


©2015- 2018 zdamsam.ru Размещенные материалы защищены законодательством РФ.