МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ (БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ)

1. Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования.

2. Противомикробные мероприятия (стерилизация, дезинфекция, антисептика, асептика).

5. Методы выделения чистых культур микроорганизмов.

6. Схема выделения чистой культуры клостридиальных анаэробов.

7. Схема выделения чистой культуры неклостридиальных анаэробов.

9. Определение биохимических свойств микробов.

11. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

1. Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций.

2.Общие принципы диагностики острых кишечных инфекций, вызванных микробами

3. Лабораторная диагностика кишечного иерсиниоза.

4. Клебсиеллы. Лабораторная диагностика склеромы и озены.

6. Кампилобактерии. Кампилобактериозы. Методы диагностики.

7. Пищевые отравления бактериальной природы. Методы диагностики.

8. Лабораторная диагностика газовой гангрены, столбняка и ботулизма.

1. Классификация грибов. Микозы. Методы диагностики.

Медицинская микробиология является одной из наиболее важных областей знаний широко используемых во врачебной практике. Студенты медики нуждаются в изучении микробиологии для успешной диагностики и лечения заболеваний. Инфекционная заболеваемость в мире до сих пор остается очень распространенной, в ее структуре постоянно происходят существенные изменения, появляются новые возбудители, изменяется характер течения хорошо известных заболеваний. В последние десятилетия в фундаментальной и прикладной микробиологии накоплены новые научные факты, разработаны новые методы исследований. В связи с этим весьма важно, чтобы в обучении студентов медицинской микробиологии дать достаточно полные знания как о биологии микроорганизмов, так и о методах их выделения из разнообразных материалов, идентификации, методах диагностики инфекционных заболеваний, а также интерпретации полученных данных.

В представленном пособии к практическим занятиям для студентов Минского медицинского института по микробиологии представлены материалы по общей микробиологии (методы микроскопии, противомикробных мероприятий, выделения чистых культур и их идентификации, изучения нормальной микрофлоры) и частной микробиологии (методы диагностики пневмококковых инфекций и клебсиеллезов, острых кишечных инфекций и пищевых отравлений кампилобактериоза, анаэробной инфекции, сифилиса, хламидиозов и микоплазмозов). Кроме того, рассматриваются методы культивирования и лабораторной диагностики ряда распространенных вирусов и грибов.

В подготовке данного пособия принимали участие большинство сотрудников кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии Минского медицинского института.

Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования - совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных (способность окрашиваться) свойств микробов в исследуемом материале (лабораторная культура, патологический материал, пробы из внешней среды) с помощью микроскопии. Основная цель - установление этиологии болезни, а также определение чистоты выделенной чистой культуры. В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических микропрепаратов: а) бактериологический мазок; б) висячая капля; в) придавленная капля; г) тонкий мазок крови, мокроты и др.; д) толстая капля; ж) препарат-отпечаток.

1. Забор материала (гной, мокрота, кровь, моча, испражнения, промывные воды бронхов и желудка, ликвор, содержимое полостей носа, вагины, трупный материал).

3. Приготовление микропрепаратов (фиксация и окраска при необходимости).

4. Микроскопия с оценкой формы, размеров, взаимного расположения микробов и т.д.

Метод прост, широко доступен, быстр, экономичен, но мало чувствителен (около 10 54 0-10 55 0 бактерий в мл) и специфичен (из-за схожести морфологии микроорганизмов разных видов).

Под противомикробными мероприятиями понимают совокупность методов уничтожения, подавления жизнедеятельности и ограничения распространения во внешней среде потенциально патогенных для человека микроорганизмов с целью предупреждения развития и лечения инфекционных болезней. Совокупность строго регламентированных и обязательных для выполнения противомикробных мероприятий в конкретных лечебных, детских или иных учреждениях и производствах носит название противомикробный режим.

К противомикробным мероприятиям, оказывающим прямое повреждающее действие на микробы, относят стерилизацию, дезинфекцию, антисептику и химиотерапию.

Под стерилизацией понимают совокупность физических или химических способов полного освобождения объектов внешней среды от вегетативных и покоящихся форм патогенных, условно-патогенных и непатогенных микроорганизмов.

Целями стерилизации являются: 1) предупреждение заноса микроорганизмов в организм человека при медицинских вмешательствах, 2) создание и поддержание асептической и безмикробной (гнотобиотической) среды, 3) исключение микробного обсеменения (контаминации) питательных сред, культур клеток, реагентов при микробиологических и иммунологических исследованиях, 4) предупреждение микробной биодеградации (разрушения) лекарственных, диагностических, продовольственных и иных материалов.

В медицинской практике стерилизации подвергают медицинский инструментарий и аппаратуру, лекарственные и диагностические препараты, перевязочный и шовный материал, белье, предметы ухода за больными, питательные среды, лабораторную посуду; при создании гнотобиотической зоны - воздух помещения, оборудование и все остальные объекты зоны (боксы, палаты и др.).

Процесс стерилизации объектов состоит из следующих этапов: 1) дезинфекция, 2) очистка, 3) сборка, группировка, размещение в стерилизаторе, 4) собственно стерилизация, 5) сушка, 6) контроль за стерилизацией, 7) хранение стерилизованных материалов.

Стерилизующие агенты и режимы стерилизации. Большинство объектов стерилизуют насыщенным паром под давлением в специальных аппаратах (паровых стерилизаторах, автоклавах). В зависимости от стерилизуемых материалов температура насыщенного пара устанавливается от 110 5о 0С до 138 5о 0С, давление - от 0,4 до 2,5 атм., экспозиция - от 3 до60 мин. Наборы инструментов, текстильные изделия в свертках, простые питательные среды стерилизуют при режиме 1 атм. (121 5о 0С) 15-30 мин. Чувствительные к температуре материалы стерилизуют при более низком давлении (0,4-0,5 атм.), устойчивые к ней - при более высоком (2,5 атм.). Стерилизация сухим жаром в аэростерилах также высокоэффективна, но высокая температура (160-180 5о 0С), длительные сроки экспозиции (1-2 часа) и сухой горячий воздух могут вызвать повреждение стерилизуемых материалов. Поэтому сухим жаром стерилизуют предметы из термостабильных материалов (стекло, металл и др.), а также гидрофобные вещества. Термолабильные материалы стерилизуют 3-4-кратным (дробным) прогреванием текучим паром при 100 5о 0С по 1 часу с перерывами в 1 сутки, в течение которых материал находится в термостате (для прорастания спор).

Крупногабаритные изделия, предметы из термолабильных и разнородных материалов стерилизуют в герметических контейнерах (например, ЭТО-стерилизаторах) парами формальдегида, этиленоксида, а также растворами формалинэтилалкоголя, формалинизопропана при экспозиции в 6-24 часа (химическая стерилизация). В заводских условиях медицинские изделия, в основном одноразовые, часто стерилизуют гамма-лучами 0,2-4,5 М рад (лучевая стерилизация). Жидкости можно простерилизовать пропусканием через мелкопористые фильтры, воздух помещений - пропусканием через бактерицидные фильтры, а также многократным «промыванием» помещения ламинарным потоком стерильного воздуха.

Эффективность стерилизации проверяют биологическим, химическим, механическим методами.

Под дезинфекцией понимают совокупность способов полного, частичного или селективного уничтожения потенциально патогенных для человека микроорганизмов на объектах внешней среды с целью предупреждения передачи возбудителей болезней от больных и микробоносителей здоровым людям.

Дезинфекция в очагах инфекционных заболеваний (квартира, дом, больничное, служебное помещение и др.) ставит цель селективного уничтожения возбудителя конкретной болезни, например, в очаге туберкулеза - возбудителя туберкулеза, дифтерии - возбудителя дифтерии, гепатита - возбудителя гепатита и т.д. Дезинфекции в этом случае подвергается та группа объектов, которая служит фактором передачи возбудителя этой болезни. Она бывает заключительной, когда инфекционный больной госпитализируется в инфекционную больницу, и текущей, когда больной остается в очаге на какой-то период времени.

В больницах, детских, общественных учреждениях ежедневно или периодически проводится профилактическая дезинфекция, ставящая цель резкого снижения численности популяции всех потенциально патогенных для человека микробов на всех объектах помещения. В лечебных учреждениях особое внимание обращают на дезинфекцию инструментария, аппаратов, белья, предметов ухода, воздуха, выделений от больных.

Дезинфицирующие средства. В подавляющем большинстве случаев для целей дезинфекции используют химические вещества, которые носят название дезинфектанты. Дезинфектанты должны обладать широким спектром действия, микробоцидным эффектом, хорошо растворяться в воде и образовывать с ней или с воздухом стойкие активные растворы, суспензии, эмульсии, аэрозоли, туманы, обладать низкой токсичностью и аллергенностью, сохранять активность в обеззараживаемой среде, не повреждать обеззараживаемые объекты, не иметь неприятного запаха, быть экологически чистыми. Чаще применяют хлорсодержащие соединения (гипохлорид кальция, гипохлорид натрия, хлорамин и др.), препараты фенола, глюконат хлоргексидина, формальдегид и глютаральдегид, алкоголи, четвертичноаммониевые соединения, перекись водорода, надмуравьиная и надуксусная кислоты, персепт, виркон.

Выбор дезинфектанта, его концентрации, лекарственной формы (раствор, аэрозоль, эмульсия, суспензия, порошок, паста, лаки, краски и др.), экспозиции (время действия) зависит от требуемой степени дезинфекции, спектра и уровня чувствительности микроба-воз-будителя, вида дезинфекции, объекта дезинфекции, условий, в которых протекает процесс дезинфекции. Среди последних важное значение имеет температура рабочей формы дезинфектанта, которая должна быть не ниже 20 5о 0С (20⁰С?).

Дезинфекция должна сопровождаться выборочным бактериологическим и иным контролем. Дезинфицирующий эффект может быть достигнут также с помощью сжигания объекта, прокаливания в пламени, воздействия горячего воздуха или пара в камерах, кипячения в воде, ультразвука, ультрафиолетового облучения, гамма-лучей, очистки, стирки, мытья, выколачивания, вытряхивания, протирания, проветривания.

Под антисептикой понимают совокупность способов уничтожения или подавления жизнедеятельности потенциально опасных для здоровья человека организмов на интактных или поврежденных коже, слизистых оболочках и в полостях с целью профилактики (профилактическая) и лечения (терапевтическая антисептика) инфекционных процессов.

Выделяют следующие категории профилактической антисептики: 1) антисептика свежих ран, 2) хирургическая антисептика рук, 3) гигиеническая антисептика рук, 4) антисептика операционного поля, 5) антисептика пупочной раны, глазных инфекций, опрелостей и ссадин кожи новорожденных, 6) предупреждение послеродового мастита, микоза стоп и других инфекций кожи и слизистых оболочек.

Терапевтическая антисептика применяется с целью: 1) подавления жизнедеятельности микробов-возбудителей местных инфекционных процессов и предупреждения сепсиса, 2) предупреждения повторного попадания микробов в патологический очаг и развития суперинфекции, реинфекции и вторичной инфекции.

Процесс антисептики состоит из следующих этапов: 1) очистка места нанесения антисептика от грязи, сала, сгустков крови, слизи, инородных частиц, 2) хирургическая обработка (при антисептике ран), 3) внесение антисептического препарата, 4) изоляция обработанного антисептиком участка от повторного проникновения микробов.

Используемые для целей антисептики факторы называют антисептическими средствами. Их подразделяют на: 1) химические антисептики, 2) биологические антисептики (бактериофаги и препараты из бактерий-антагонистов), 3) физические и механические факторы (хирургическая обработка, промывание, дренирование, сорбция и др.).

Антисептические препараты относятся к следующим классам химических веществ: хлор, йод и другие галогены; органические и неорганические кислоты; перекись водорода и перманганат калия; формальдегид и спирты; фенол и его препараты; соли тяжелых металлов; красители; катионные и анионные поверхностно-активные вещества; нитрофурановые, сульфаниламидные, 8-оксихинолиновые, хинолоновые, имидазольные и др. соединения.

Готовые лекарственные формы антисептиков прежде всего должны вызывать гибель (бактерицидный эффект) или задерживать рост и размножение (бактериостатический эффект) микробов и не должны оказывать повреждающее действие на организм человека. Кроме того, к ним предъявляются требования: не снижать противомикробную активность в присутствии патологических и физиологических субстратов, обладать достаточно широким спектром действия, хорошо растворяться в липидах, быть недорогими, экологически чистыми в производстве и стабильными при хранении.

Перед применением антисептика с целью лечения от больного выделяют возбудитель болезни и определяют его чувствительность к дезинфектанту. При выборе антисептика для профилактической антисептики ориентируются на спектр и уровень естественной чувствительности микробов, которые обитают в месте нанесения антисептика.

В больничных стационарах в связи с широким распространением устойчивых к антибиотикам, антисептикам и дезинфектантам вариантов бактерий устанавливают систематический контроль за их распространением.

Асептика - это совокупность противомикробных мероприятий, направленных на предупреждение развития инфекционного заболевания во время медицинских вмешательств или нарушений технологического процесса при микробиологических исследованиях и производстве различных материалов.

В медицинской практике асептические условия создаются при производстве хирургических вмешательств, приеме родов, эндоскопических процедурах, парентеральном введении лекарств и других медицинских вмешательствах, а также при больничном содержании лиц с высоким риском развития инфекции. Для этого инструментарий, перевязочный и шовный материал, инъекционные растворы, халаты, маски, перчатки, дренажи и другие соприкасающиеся с раной объекты стерилизуют; руки лиц, принимающих участие в медицинском вмешательстве, операционное поле пациента подвергают антисептической обработке; воздух помещений, в которых проводят асептические мероприятия, и все, что в них находится, дезинфицируют; асептическая зона с помощью шлюзов или аналогичных приспособлений изолируется от смежных помещений.

В микробиологической практике асептика включает: 1) забор материала для исследования стерильным инструментарием и в стерильную посуду в условиях, исключающих его микробную контаминацию посторонней микрофлорой; 2) предупреждение контаминации материала во время его доставки в лабораторию; 3) использование стерильных петель, пипеток, питательных сред, посуды, реактивов и других объектов в процессе микробиологических исследований; 4) предупреждение контаминации микробных культур с рук, волос, одежды лабораторного работника, а также с нестерильных объектов внешней среды; 5) работу в стерильных боксах, ламинарном потоке стерильного воздуха, в зоне пламени спиртовки или газовой горелки. Несоблюдение указанных мер приводит к неправильному заключению о виде выделенной культуры и ее свойствах, что, в свою очередь, ведет к ошибочному диагнозу и неадекватным мерам терапии и профилактики.

По совокупности признаков в сравнении со свойствами эталонных (типовых) штаммов указывается вид выделенного из материала микроорганизма.

Достоинства: относительно высокая чувствительность и точность, возможность определить численность микробов в исследуемом материале, а также чувствительность к антибиотикам.

Недостатки: относительная длительность, метод дорогостоящий.

Гемолизины - ферменты расщепления фосфолипидной мембраны эритроцитов. Они выявляются посевом культуры на кровяной агар (5-10%). Различают 7 b 0-гемолиз или полный гемолиз, когда образуются зоны просветления вокруг колоний, 7a 0-гемолиз, неполный гемолиз, при наличии зон зеленого цвета вокруг колоний. Отсутствие гемолиза обозначается как 7 g 0-гемолиз.

Цитотоксины - ферменты оказывающие токсический эффект на клетки мишени. Цитотоксичность токсина В анаэробных микроорганизмов определяют на культуре клеток. С этой целью 1 гр испражнений разводят в фосфатном буфере 1:1О вес/объем, центрифугируют 3О минут при 4ООО об/мин. Супернатант фильтруют на фильтре 2О нм и вносят в монослой культуры клеток МакКоя и инкубируют при 37 5о 0С 24-48 часов до достижения токсического эффекта (округление клеток).

Иммунохимическое определение продукции токсинов. Используется, как правило, иммуноферментный метод определения многих экзотоксинов - дифтерийного, холерного, стафилококкового и др. Для этого применяются тест-системы на основе моноклональных антител к определенному экзотоксину.

Плазмокоагулаза - фермент, свертывающий плазму крови животных. Определяют в пробирочной реакции. В 1 мл цитратной плазмы кролика или человека (цельной или разведенной в 2 и 4 раза физраствором) размешивают петлю суточной агаровой культуры микроба. Смесь инкубируют в термостате при 37 5о 0С. В положительных случаях через 2-4 часа плазма свертывается (появляется сгусток).

1. Определение оксидаз. На фильтровальную бумагу, смоченную 1% раствором тетраметилпарафенилендиамина, петлей наносят полосы испытуемой культуры. В положительном случае появляется фиолетовое окрашивание полос (в течение 1 минуты).

2. Определение каталазы. Каплю 3% раствора перекиси водорода наносят на предметное стекло и туда вносят петлю испытуемой культуры. В присутствии каталазы образуются пузырьки водорода.

3. Определение дегидраз. О наличии дегидраз судят по редуцирующей способности микроба, т.е. способности восстанавливать некоторые органические красители (например, 1% водный раствор метиленовой синьки). К столбику сахарного агара (донатор водорода) добавляют краситель (акцептор водорода) и засевают микробную культуру уколом. В положительных случаях растущий на такой среде микроб ее обесцвечивает.

4. Определение спектра коротко-цепочечных жирных кислот (КЦЖК). Анаэробные микроорганизмы продуцируют промежуточные продукты включающие короткоцепочечные жирные кислоты и спирты, спектр (профиль) которых различен у разных видов микроорганизмов и позволяет проводить идентификацию микроорганизмов до уровня рода.

Наиболее часто исследуют уксусную, пропионовую, бутиловую, изобутиловую, валериановую, изовалериановую, капроновую и изокапроновую аминокислоты. Для определения КЦЖК используют метод газо-жидкостной хроматографии. Идентифицируют такие микроорганизмы как актиномицеты, пропионобактерии, эубактерии, бифидобактерии, клостридии (перфрингенс, спорогенес, дифициле, тертиум).

В последние годы в бактериологических лабораториях применяются коммерчески выпускаемые тест-системы для быстрой биохимической идентификации (для определения биохимической активности разных групп микроорганизмов: например, 2О тестов для энтеробактерий и 3O тестов для анаэробов. Схема идентификации включает следующие этапы:

Колонии---Приготовление---Внесение---Инкубация---Учет(+ -)—Интерсуспензии-- суспензии 4 часа 37 5о 0С –претация в среду

В качестве материала для идентификации используют хорошо изолированную колонию на чашке или чистую культуру в пробирке, из которой готовят суспензию в концентрации стандарта оптической плотности N4, затем по 55 мкл данной суспензии вносят в лунки со средами данной тест-системы. Планшета со стрипами инкубируется при 35 5о 0С 4 часа. Учет может осуществляться либо автоматически (используя прибор АТB) или визуально. Результат биохимической реакции оценивают в виде + или - и вносят в референс-таблицу, в которой положительному результату соответствует численное выражение, в результате чего получается определенный числовой профиль, соответствующий специально разработанному индексу аналитического профиля, позволяющему быстро идентифицировать тот или иной микроорганизм.

Для определения чувствительности микроорганизмов применяют три метода: диффузии препарата в агар из бумажных дисков, серийных разведений в бульоне и в плотной питательной среде. Имеются также ускоренные методы.

В качестве критерия чувствительности микробов к антибиотикам избирают их терапевтические концентрации в крови и др. биотопах животного организма после введения определенных доз препарата. Мерой чувствительности микробов является минимальная концентрация препарата (мкг/ед/мл), которая подавляет рост микробов на питательных средах в стандартных условиях постановки опыта (минимальная подавляющая концентрация - МПК).

Для проведения этого метода нужны стандартные заводские диски, пропитанные антибиотиками в определенной концентрации и стандартная питательная среда. Из суточной микробной культуры готовят взвесь на физрастворе густой 1 млрд. микробных тел. в 1 мл, которую затем разводят в 10 раз. На поверхность плотной среды наливают 1-2 мл указанной культуры и покачиванием чашки равномерно распределяют ее по всей поверхности среды. Остаток удаляют пипеткой. Среду подсушивают 10-15 мин при комнатной температуре, после чего на поверхность газона стерильным пинцетом накладывают диски (не более 6 на чашку) на расстоянии 2 см друг от друга и от краев чашки. Инкубируют в термостате при 37 5о 0С - 24 часа.

Учет: в падающем свете на фоне темной поверхности измеряют диаметр (с учетом диаметра диска) задержки роста. Оценку результатов проводят по специальной таблице путем сопоставления диаметра зон задержки роста испытанной культуры с пограничными значениями диаметра зоны в таблице. Культуру относят к одной из трех категорий: чувствительная, умеренно-устойчивая и устойчивая. Указанные категории предложены клинической химиотерапией исходя из отношения между МПК и концентрацией препарата в крови при введении терапевтических доз. К чувствительным относят культуры, рост которых подавляется концентрациями препарата, создаваемыми в сыворотке крови больного в процессе назначения обычных доз антибиотика. Умеренно-устойчивыми считаются культуры, подавляемые концентрациями, которые могут быть достигнуты при введении максимальных доз препарата. Устойчивые - культуры, рост которых не подавляется при введении даже максимально допустимых доз препарата.

Указанный метод является полуколичественным. Для получения количественных результатов используют методы серийных разведений.

Этот метод более чувствителен и точен. Каждый антибиотик испытывают в трех концентрациях (исходя из уровней чувствительности микроорганизмов), которые добавляют к расплавленному и охлажденному агару. Агар с антибиотиками разливают в три чашки Петри (по одной чашке на каждую концентрацию). Контролем служит чашка с агаром без антибиотика. Посев производят петлей или лучше штампом-репликатором, который позволяет одновременно определить чувствительность к трем концентрациям антибиотика 25-50 культур (в зависимости от числа лунок в штампе). Учет производят спустя сутки роста в термостате. Культура считается чувствительной, если на месте посева нет ни одной колонии. Микроорганизмы, рост которых подавлен всеми 3 концентрациями, рассматривают как чувствительные (в этом случае можно применять антибиотик в терапевтической дозе) - 2-й и 3-й концентрациями, как среднечувствительные (антибиотик можно применять только в увеличенной дозе) - 3-й; как умеренно-устойчивые микроорганизмы (антибиотик можно применять только местно), растущие на всех трех концентрациях относят к устойчивым (антибиотик нельзя применять).

Для примера приведем схему определения чувствительности культуры к пенициллину.

Позволяют получить результат через 3-4 часа. Чаще всего пользуются методом, основанным на изменении окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) среды в процессе роста микроба в присутствии антибиотика.

Ход работы: при использовании метода бумажных исков или серийных разведений антибиотика в агаре через 4-6 часов роста культуры поверхность чашки обрабатывают индикатором, реагирующим на ОВП среды (тетразолий хлорид). В местах роста микроба среда окрашивается в красный цвет, при отсутствии роста микроба цвет среды не меняется. Учет и критерии оценки, как и при обычных методах.

В последние годы разработана специальная тест-система ускоренного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, основанного на посеве теста микроба в жидкую среду, инкубацией 4-6 часов с последующим определением турбидиметрическим методом прироста мутности раствора опытных образцов в сравнении с контрольными.

Серологическая диагностика начинается с получения сывороток от больных. В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации, гемагглютинации или РСК. Диагноз основан на обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител в динамике болезни.

1 - посев 10 мл венозной крови в среду Раппопорта;

2а - учет среды Раппопорта: покраснение среды без газа в поплавке - возбудитель брюшного тифа, покраснение с газом в поплавке - возбудители паратифов или сальмонеллезов;

3а - обнаружение бесцветных колоний на этих средах;

4а - учет роста на среде Олькеницкого (см. выше);

4б - определение чистоты выделенной культуры;

4в - установление антигенной структуры: сначала в РА на стекле с монорецепторными сыворотками к О-антигенам: для группы А - О2, группы В - О4, 5; Д - Н-О9. Затем в такой же реакции с сыворотками к специфическим антигенам (в пределах данной группы);

4г - определение дополнительных биохимических и морфологических свойств (разло-жение индола, подвижность);

4д - определение чувствительности к поливалентным видоспецифическим бактриофагам;

4е - определение чувствительности к антибиотикам.

I этап - материал засевают петлей или тампоном на одну из плотных элективных сред (Эндо, Плоскирева, висмутсульфитагар). Посевы инкубируют в течение 24 часов при 37 5о 0С, а затем дополнительно 24 часа при 20-22 5о 0С.

Одновременно испражнения засевают в одну из сред накопления (МПБ или пептонную воду). Кровь засевают в соотношении 1:10 только в среды накопления. Посевы помещают при 4-5 5о 0С и выдерживают до 30 суток, периодически высевая через каждые 3-5 дней на плотные элективные среды. Y. enterocolitica при низкой температуре размножаются в этих средах, в то время как сальмонеллы, шигеллы, кишечная палочка, протей не размножаются.

II этап - Просматривают посевы на плотных средах и отбирают подозрительные колонии (округлые, величиной от 0,5 до 2 мм в диаметре, сероватого цвета на Эндо и Плоскирева и коричневого на висмутсульфитагаре). Из колоний делают мазки по Граму и при наличии грам- палочек отсевают на среду Ресселя.

III этап - при изменении цвета столбика на среде Ресселя из роста на ней делают мазок по Граму на чистоту и изучают следующие тесты:

IV этап - Учет результатов и выдача окончательного ответа.

Пищевые отравления - острые системные заболевания, возникающие в результате приема в пищу продуктов, массивно обсемененных микроорганизмами или содержащих микробные экзотоксины. Пищевые отравления бактериальной природы подразделяются на пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы (интоксикации), а также отравления смешанной этиологии.

1. Пищевые токсикоинфекции (ПТИ) - острые кишечные заболевания с инфекционным воспалением кишечника, возникающие в результате употребления в пищу массивно обсемененных некоторыми бактериями продуктов. Возбудителями могут быть условно-патогенные представители семейства Enterobacteriaceae - E.сoli, Рroteus (P. vulgaris, mirabilis, Morganella morganii), Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella pneumoniae; семейства Vibrionaceae - V. parahaemoliticus; семейства Bacillaceae - B. cereus, C. perfringens серотипа А; семейства Streptococcaceae - S. faecalis; семейства Pseudomonadaceae - P. aeruginosa и др.

После приема пищи возбудитель бурно размножается в тонком кишечнике, проникает в лимфоидный аппарат, где происходит его массовая гибель с выделением эндотоксина. Эндотоксин вызывает поражение интрамурального нервного аппарата кишечника и клеток ЦНС, сосудов, а бактерии вызывают воспалительный процесс в кишечной стенке. Заболевание начинается внезапно с тошноты, рвоты, поноса, болей в животе и общих симптомов: головная боль, падение сердечной деятельности, вплоть до коллапса.

По типу ПТИ могут протекать заболевания, вызываемые энтеропатогенными эшерихиями, сальмонеллами, шигеллами (S. sonnei) и иерсиниями (Y. enterocolitica). При этих инфекциях клинический диагноз ставится соответственно их нозологической форме: колиэнтерит, сальмонеллез, дизентерия, иерсиниоз. Этот диагноз устанавливается после выделения из исследуемого материала (испражнения, моча, рвотные массы, остатки пищи) соответствующего возбудителя.

2. Пищевые микробные токсикозы (интоксикации) - острые заболевания, возникающие при употреблении в пищу продуктов, в которых в результате массивного размножения микробов содержится большое количество экзотоксина. К ним относят ботулизм, токсикозы, вызванные стафилококковым энтеротоксином и токсинами микроскопических грибов. При этих формах пищевого отравления патогенез заболевания и его клинические проявления обусловлены действием микробного экзотоксина. Микробные экзотоксины не разрушаются при кипячении, устойчивы к пищеварительным ферментам и кислому содержимому желудка.

Пищевые отравления часто носят групповой характер. Каждый случай пищевого отравления подлежит обязательному санитарно-эпидемиологическому расследованию с целью установления причин заболевания и разработки мер ликвидации вспышки и профилактики. Расследование пищевых отравлений производится немедленно с участием санитарного врача по гигиене питания или главврача СЭС и врача-бактериолога.

Для исследования от больных забирают рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, мочу, кровь, а также секционный материал (в случае летального исхода). Одновременно производят отбор остатков подозреваемой пищи (употребленной заболевшим), исходных продуктов и полуфабрикатов, которые испол

ЧТО И КАК ПИСАЛИ О МОДЕ В ЖУРНАЛАХ НАЧАЛА XX ВЕКА Первый номер журнала «Аполлон» за 1909 г. начинался, по сути, с программного заявления редакции журнала...

ЧТО ПРОИСХОДИТ, КОГДА МЫ ССОРИМСЯ Не понимая различий, существующих между мужчинами и женщинами, очень легко довести дело до ссоры...

Конфликты в семейной жизни. Как это изменить? Редкий брак и взаимоотношения существуют без конфликтов и напряженности. Через это проходят все...

Что делает отдел по эксплуатации и сопровождению ИС? Отвечает за сохранность данных (расписания копирования, копирование и пр.)...

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте: