|
|
Бактериологическая диагностика1. Забор материала. Характер материала зависит от первичной или вторичной локализации микроба-возбудителя. Если материалом служат испражнения, что чаще всего бывает, то их берут до начала или после суточного перерыва в антибактериальной терапии. Материал лучше забирать ректальной трубкой, тампоном со стерильной пеленки или стерильной пергаментной бумаги, специальным устройством для забора фекалий (ни в коем случае не допуская его контакта с дезинфектанатами). Если материалом служит кровь, то забирают 10,0 мл крови из вены локтевого сгиба. 2. Транспортировка материала осуществляется в системе «стекло, металл» в течение не более трех часов после его забора или в консерванте с сопровождающими документами медицинским работником. 3. Питательные среды, используемые для бактериологического исследования можно подразделить на три группы: а) среды обогащения, создающие условия преимущественного размножения выделяемого возбудителя и основанные либо на принципе наличия в среде факторов активации роста данного микроба, либо на принципе подавления роста сопутствующих микробов-антагонистов. Первой группе соответствует среда Раппопорта, второй - селенитовая, магниевая, Мюллера, с пенициллином и т.д.; б) среды дифференциально-диагностические. Это плотные питательные среды, содержащие дифференцирующий углевод - лактозу и индикатор. Кишечные палочки, разлагающие лактозу (лактозоположитель-ные), растут в виде окрашенных колоний в зависимости от типа среды в красный и оранжевый (среда Эндо, Плоскирева) или фиолетовый (среда Левина) цвет. Клебсиеллы пневмонии разлагают лактозу в среде с индикатором бромтимоловым синим и образуют колонии желтого цвета, в то время как колонии лактозоотрицательных биоваров формируют колонии цвета среды. Сальмонеллы и шигеллы на средах Эндо, Левина, Плоскирева также не разлагают лактозу и дают бесцветные колонии; в) среды накопления чистой культуры. Чаще применяется среда Олькеницкого (скошенный агар): она состоит из столбика, скошенной части и включает лактозу, глюкозу и сахарозу, индикатор, реагенты для определения сероводорода и уреазы. Посев производят уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенной части. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза - на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды, при образовании газа - формируются пузырьки и разрывы в среде, при продукции сероводорода - почернение по ходу укола, а - уреазы - изменение цвета среды на оранжевый. 4. Идентификация выделенных культур основана на определении: * общего для семейства признака - морфологии бактерий (гр/-палочки), оксидазоотрицательные, наличия капсулы (у клебсиелл); * цвета колоний на чашечных средах; * подвижности (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы неподвижны); * биохимических свойств; * антигенной структуры; * чувствительности к антибактериальным препаратам; * чувствительности к бактериофагам. Определение антигенной структуры основано на предварительном установлении серогруппы, чаще с монорецепторными адсорбированными сыворотками, а затем серовара тоже с адсорбированными сыворотками.
Серологическая диагностика
Серологическая диагностика начинается с получения сывороток от больных. В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации, гемагглютинации или РСК. Диагноз основан на обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител в динамике болезни.
Диагностика кишечных эшерихиозов (колиэнтеритов).
Цель: выделение чистой культуры эшерихий и отличие ее от условно-патогенных представителей нормальной микрофлоры кишечника. Метод: бактериологический. Материал для исследования: фекальные массы. Схема: 1 - посев на среду Эндо (Левина) 2а - обнаружение окрашенных колоний, микроскопия их по Граму 2б - предварительная дифференциация патогенных эшерихий от условно-патогенных: постановка РА на стекле со смесью сывороток к патогенным серогруппам 2в - положительно реагирующая в реакции агглютинации колония отсевается на среду Олькеницкого 3а - учет изменения среды Олькеницкого: посинение и разрыв всей среды 3б - определение чистоты выделенной культуры 3в - определение серовара патогенной эшерихии (путем постановки р. агглютинации с отдельными ОК-сыворотками на стекле и в пробирках) с живой (определение К-антигена) и убитой кипячением (определение О-антигена) культурой 3г - проба на индол, подвижность и чувствительность к антибиотикам Серологический метод - постановка реакции агглютинации с сывороткой больного (на 2-ой неделе заболевания).
ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ А И В САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ.
Бактериологический метод.
Материал для исследования см. выше. Схема работы (выделение гемокультуры): 1 - посев 10 мл венозной крови в среду Раппопорта; 2а - учет среды Раппопорта: покраснение среды без газа в поплавке - возбудитель брюшного тифа, покраснение с газом в поплавке - возбудители паратифов или сальмонеллезов; 2б - микроскопия роста; 2в - пересев на среды Левина или Плоскирева; 3а - обнаружение бесцветных колоний на этих средах; 3б - микроскопия колоний; 3в - пересев на среду Олькеницкого; 4а - учет роста на среде Олькеницкого (см. выше); 4б - определение чистоты выделенной культуры; 4в - установление антигенной структуры: сначала в РА на стекле с монорецепторными сыворотками к О-антигенам: для группы А - О2, группы В - О4, 5; Д - Н-О9. Затем в такой же реакции с сыворотками к специфическим антигенам (в пределах данной группы); 4г - определение дополнительных биохимических и морфологических свойств (разло-жение индола, подвижность); 4д - определение чувствительности к поливалентным видоспецифическим бактриофагам; 4е - определение чувствительности к антибиотикам.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КИШЕЧНОГО ИЕРСИНИОЗА
Для заболеваний, вызываемых Yersinia enterocolitica, характерно клиническое разнообразие. Наиболее часто встречается кишечная форма, значительно реже - заболевания с симптомами аппендицита, еще реже - септическая форма. Кишечная форма протекает в виде энтеритов, энтероколитов и гастроэнтероколитов. Специфические симптомы часто отсутствуют, поэтому по клинической картине без выделения возбудителя ее трудно отличить от сальмонеллеза, дизентерии, энтероколитов другого происхождения.
Бактериологический метод исследования.
Материал для исследования: при кишечной форме возбудитель выделяют из испражнений; при аппендикулярной - из мезентериальных лимфатических узлов и крови; при септической - из испражнений и крови. Ход исследования I этап - материал засевают петлей или тампоном на одну из плотных элективных сред (Эндо, Плоскирева, висмутсульфитагар). Посевы инкубируют в течение 24 часов при 37 5о 0С, а затем дополнительно 24 часа при 20-22 5о 0С. Одновременно испражнения засевают в одну из сред накопления (МПБ или пептонную воду). Кровь засевают в соотношении 1:10 только в среды накопления. Посевы помещают при 4-5 5о 0С и выдерживают до 30 суток, периодически высевая через каждые 3-5 дней на плотные элективные среды. Y. enterocolitica при низкой температуре размножаются в этих средах, в то время как сальмонеллы, шигеллы, кишечная палочка, протей не размножаются. II этап - Просматривают посевы на плотных средах и отбирают подозрительные колонии (округлые, величиной от 0,5 до 2 мм в диаметре, сероватого цвета на Эндо и Плоскирева и коричневого на висмутсульфитагаре). Из колоний делают мазки по Граму и при наличии грам- палочек отсевают на среду Ресселя. III этап - при изменении цвета столбика на среде Ресселя из роста на ней делают мазок по Граму на чистоту и изучают следующие тесты:
IV этап - Учет результатов и выдача окончательного ответа.
  Что делать, если нет взаимности? А теперь спустимся с небес на землю. Приземлились? Продолжаем разговор...  Что способствует осуществлению желаний? Стопроцентная, непоколебимая уверенность в своем...  ЧТО ПРОИСХОДИТ, КОГДА МЫ ССОРИМСЯ Не понимая различий, существующих между мужчинами и женщинами, очень легко довести дело до ссоры...  ЧТО ПРОИСХОДИТ ВО ВЗРОСЛОЙ ЖИЗНИ? Если вы все еще «неправильно» связаны с матерью, вы избегаете отделения и независимого взрослого существования... Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
|