|
РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
Реакция протекает в две фазы. Первая фаза - взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента. Вторая - выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает.
Результат опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной - при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая» кровь). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне (++++, +++, ++, +).
Рис. 1. Схема реакции связывания комплемента.
Рис. 2. Постановка и результат РСК.
Выводы: В исследуемой сыворотке выявлены антитела.
РСК позволяет выявить антитела к любому штамму одного и того же серотипа вируса. Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител в парных сыворотках (в период эпидемии гриппа) и двукратное нарастание в сыворотках крови больных при характерной клинической картине.
Рис. 3. Серодиагностика с парными сыворотками.
Выводы: В парных сыворотках больного выявлено четырехкратное увеличение титра антител к вирусу гриппа А.
МЕТОД ФЛЮОРЕСЦИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ (МФА) или
РЕАКЦИИ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ (РИФ)
Иммунофлюоресцентный метод является методом выбора для быстрого выявления и идентификации неизвестного микроорганизма в исследуемом материале.
Аг + АТ + электролит = светящийся в УФ - лучах комплекс
Микроб сыворотка, меченная флюорохромом
Часто используют краситель изотиоционат флюоресциина - ФИТЦ
При исследовании этим методом используют люминесцентный микроскоп.
Постановка Р И Ф
- На мазок наносят 30 мкл раствора ФИТЦ-меченных антител.
- Помещают стекло во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре в течение 20-25 мин, или в термостате при 37° С в течение 15 мин.
- Промывают стекло в проточной водопроводной воде 2 мин, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
- На высушенный мазок наносят каплю монтирующей жидкости, мазок накрывают покровным стеклом и микроскопируют с использованием люминесцентного микроскопа или люминесцентной насадки к обычному оптическому микроскопу.
Рис. 4. Пневмококки, выявленные РИФ (люминесцентная микроскопия).
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА)
Иммуноферментный анализ или метод – выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой. После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат-хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции – интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале.
Рис. 5. Иммуноферментный анализ (ИФА) (схема).
Рис. 6. Результат ИФА. Желтый цвет раствора в лунке яляется положительным результатом.
Основы иммунопрофилактики
ВОПРОСЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ
по разделу Основы иммунологии
(устный ответ на вопросы в билете)
- Общее понятие об иммунитете. Строение иммунной системы человека.
- Клеточные факторы неспецифической защиты организма человека.
- Гуморальные факторы неспецифической защиты организма человека.
- Антигенпредставляющие клетки (свойства, функции, стадии).
- Антигены (свойства, специфичность). Антигены организма человека.
- Антигены (свойства, специфичность). Антигены микроорганизмов.
- Иммунокомпетентные клетки (иммуноциты). Лимфоциты (свойства, происхождение и дифференцировка, функции).
- Иммуноглобулины (структура, свойства, классы, происхождение, функции).
- Гуморальный иммунный ответ.
- Клеточный иммунный ответ.
- Иммунологическая память.
- Иммунологическая толерантность.
- Регуляция иммунного ответа.
- Виды иммунитета.
- Аллергические реакции организма.
- Иммунодефицитные состояния организма человека. Оценка иммунного статуса.
- Процессы взаимодействия антигена и антитела, условия необходимые для образования «решетки». Серологические реакции в диагностике инфекционных болезней.
- Реакция агглютинации и ее варианты.
- Реакция преципитации и ее варианты.
- Реакция связывания комплемента. Реакции с использованием меченых антител или антигенов.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
|
