Определение редуцирующей способности.

1. В 5 мл среды - молока с метиленовым синим - засевают петлю исследуемой культуры с плотной питательной среды или 0,1 мл 18-часовой бульонной культуры н после ч инкубации учитывают результаты роста. При положительной реакции на редукцию метиленового синего среда из голубой становится кремового цвета, а при слабоположительной — приобретает зеленоватое окрашивание.

2..Пробирки с лакмусовым молоком, средой Минкевича засевают так же, как молоко с метиленовым синим, суточной культурой с плотной или жидкой питательной среды. Посевы инкубируют в термостате в течение 10 дней, ежедневно наблюдая за изменением цвета среды. Редукция лакмуса проявляется полным обесцвечиванием молока, имеющего розовато-сиреневый цвет до посева. В протоколе исследования редукцию лакмуса обозначают буквой Р.

Среда Минкевича позволяет также выявлять кислото - или щелочеобразование, выражающееся соответственно в покраснении или посинении молочной среды. Образование кислоты обозначается буквой К, щелочи — буквой Щ.

Определение фермента каталазы. Некоторые виды микроорганизмов, принадлежащие к группе аэробов, в процессе дыхания образуют перекись водорода, являющуюся клеточным ядом. Количество перекиси водорода в культуре никогда не достигает высоких концентраций, так как по мере образования перекись расщепляется на воду и молекулярный кислород при участии фермента каталазы. На поверхность микробной культуры, выращенной на плотной питательной среде в чашке Петри, наносят 1—2 мл 1% раствора перекиси водорода так, чтобы она покрывала поверхность культуры тонким слоем. Появление пузырьков газа в слое нанесенной жидкости свидетельствует об образовании кислорода в результате расщепления перекиси водорода под действием каталазы. Подобный результат в протоколе опыта отмечается знаком + как положительный результат реакции на каталазу.

ЗАНЯТИЕ 8. Методы микробиологического исследования воды, воздуха и почвы.

Цель занятия. Ознакомиться с правилами взятия и пересылки проб воды и почвы для исследования. Определить общее количество живых микроорганизмов в 1 г или 1 мл. Исследовать воздух седиментационным (метод Коха).

Оборудование и материалы. Стерильные колбы с пробкой, пробирки с 9 мл стерильной воды в каждой, стерильных чашки Петри, завернутые в бумагу. Стерильные пипетки (на 2 мл каждая). Пробирки с расплавленным МПА, по 12 мл в каждой. Микробиологические петли. Предметные и покровные стекла. Раствор Люголя. Кедровое масло. Горелки.

Исследование воды проводят с целью выявления общей микробной загрязненности, обнаружения в ней патогенных микробов и установления наличия кишечной палочки (определение коли-титра). Воду для исследования берут из открытых водоемов и из водопровода. Взять воду из крана просто, труднее брать пробы воды на больших глубинах. Для этого существуют специальные приборы (батометры), которые опускают на тросах на определенную глубину. Там, на глубине, прибор открывается и в него набирается вода, после чего его поднимают на поверхность.

Взятие проб из открытых водоемов. При взятии проб воды необходимо соблюдать определенные правила.

1. Если имеется источник загрязнения, то из таких водоемов берут три пробы воды: выше источника загрязнения, против него и ниже по течению.

2. Пробы воды из колодцев берут 2 раза: утром до начала разбора воды и вечером после разбора.

3. Из рек, озер и прудов воду берут на глубине 0,5 1 м от поверхности и на расстоянии 1—2 м от берега.

Пробы воды берут в хорошо вымытые (желательно стерильные) стеклянные бутыли с притертыми пробками. Дли анализа необходимо два и более литров воды. К каждой пробе воды прилагают сопроводительную ведомость, в которой отмечают:

1. Наименование источника и место его нахождения.

3. Место взятия пробы (расстояние от берега и глубина).

4. Температура воздуха, сведения об осадках в день взятия пробы и за последние десять дней.

8. Должность и место службы лица, взявшего пробу, и его подпись.

Пробы воды в лабораторию доставляют немедленно, зимой их предохраняют от замерзания, летом — от перегревания.

Исследование водопроводной воды. В течение 10 -15 мин воду спускают из водопроводной трубы, после чек» пламенем горелки (спиртовки) обжигают кран. Воду набирают в стерильную колбу. Заранее готовят две пробирки со стерильной водой, три стерильные чашки Петри и три пипетки.

Из колбы, в которую отобрана вода для исследования, пипеткой берут 2 мл; 1 мл вносят в первую стерильную чашку и 1 мл — в первую пробирку с 9 мл стерильной воды. Второй пипеткой воду перемешивают в первой пробирке. Получается разведение 1: 10. Затем этой же пипеткой 1 мл разведения переносят, но вторую стерильную чашку и 1 мл - во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды, но не перемешивают. Третьей пипеткой перемешивают воду во второй пробирке (разведение 1:100) и 1 мл переносят в третью чашку.

После внесения в каждую чашку по 1 мл воды в разведениях 1:100, 1:10 и не разведенной выливают по 10—12 мл расплавленного и охлажденного до 45⁰С МПА. Чашку быстро закрывают и вращательными движениями перемешивают расплавленный МПА с водой. На чашке (крышке) карандашом или специальными чернилами делают надписи с указанием даты посева, разведения, фамилии студента, под группы. Чашки переворачивают вверх дном и ставят в термостат при температуре 35—37⁰С.По количеству выросших колоний, с учетом разведения, судят о содержании микробов к засеянном объеме воды.

Имеется несколько методов микробиологического исследования воздуха, но наиболее простым из них является седиментационный - оседание микробов по Коху. При использовании этого метода чашки Петри с питательной средой открывают на 5 мин, а иногда и на более продолжительное время (в зависимости от загрязнения) в том помещении, где необходимо определить чистоту воздуха. Чашки закрывают и ставят в термостат при температуре 30—35⁰С на 2—3 сут. Подсчет колоний проводят на всей поверхности чашки. Считают, что из каждой живой клетки вырастает колония. Примерно на площади 100 см в течение 5 мин оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха, а в 1 м³ в 100 раз больше.

Загрязненность воздуха микробами можно оценить также фильтрационными методами. Один из них предложен Дьяковым. По этому методу определенный объем воздуха пропускают через стерильную питательную среду (мясопептонный бульон) или изотонический раствор натрия хлорида и стеклянные бусы. После тщательного перемешивания среды и проникших в нее микробов воздуха 1 мл такой смеси вносят в стерильную чашку Петри. Заливают расплавленным и охлажденным до 40—45⁰С мясопептонным агаром, среду равномерно распределяют вращательными движениями по дну чашки и оставляют до уплотнения. Чашки, перевернутые вверх дном, помешают в термостат при температуре35—37⁰С. Через 2—3 сут подсчитывают выросшие колонии. Учитывая количество пропущенного воздуха и объем среды, определяют число живых микробных клеток в 1 м³ воздуха.

Вместо жидкой среды для определения микробов в воздухе можно использовать сухие сыпучие вещества (порошок сахара), которым и заполняют стерильные стеклянные трубки. После пропускания определенного объема воздуха через такую трубку порошок сахара растворяют в 5 мл стерильной воды и 1 мл полученного раствора высевают в чашку с мясопептонным агаром. Количество микробов в 1 м ³ определяют с учетом прошедшего воздуха, разведения и объема высеянного раствора.

Система охраняемых территорий в США Изучение особо охраняемых природных территорий(ООПТ) США представляет особый интерес по многим причинам...

Конфликты в семейной жизни. Как это изменить? Редкий брак и взаимоотношения существуют без конфликтов и напряженности. Через это проходят все...

Что вызывает тренды на фондовых и товарных рынках Объяснение теории грузового поезда Первые 17 лет моих рыночных исследований сводились к попыткам вычислить, когда этот...

ЧТО И КАК ПИСАЛИ О МОДЕ В ЖУРНАЛАХ НАЧАЛА XX ВЕКА Первый номер журнала «Аполлон» за 1909 г. начинался, по сути, с программного заявления редакции журнала...

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте: