|
Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средахСтр 1 из 2Следующая ⇒ Стоматологический факультет ЗАНЯТИЕ № 1.1.4
ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ
Цель занятия: изучить культуральные и биохимические свойства бактерий; основные биологические свойства аэробов, методы выявления чистых культур аэробов с целью их идентификации.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
· описать культуральные и биохимические свойства бактерий.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней; методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей. Работа № 1. Методы выделения и идентификации аэробных бактерий Цель: изучить основные методы выделения и идентификации аэробов (см. теоретическую справку). I
II
А)
Ж)
) Е)
В) Д)
Реакция агглютинации
I. Сбор исследуемого материала II. Посев исследуемых микроорганизмов на простые, ДДС и элективные питательные среды с целью получения изолированных колоний III. Накопление чистой культуры на скошенной питательной среде IV. Идентификация выделенной чистой культуры А) изучение морфологических и тинкториальных свойств Б) изучение культуральных свойств В) изучение антигенной структуры возбудителя с помощью постановки реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными сыворотками Г) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на среды Гисса Д) определение чувствительности микробов к антибиотикам, с помощью метода бумажных дисков Е) проба с бактериофагами (реакция фаголизабельности) Ж) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания * проведение внутривидовой идентификации для выявления источников инфекции (фаготипирование)
Работа № 2. Питательные среды
Цель: ознакомиться с питательными средами, используемыми для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях.
Самостоятельная работа: классифицировать предложенные питательные среды; результаты оформить в виде таблицы (см. теоретическую справку).
Вывод:
Работа № 3. Характер роста бактерий на плотных питательных средах (культуральные свойства)
Цель: изучить культуральные свойства микроорганизмов на плотных питательных средах. Самостоятельная работа: по предложенным критериям описать колонии микроорганизмов, выросших на МПА (посев воздуха); результаты внести в таблицу; сделать вывод.
Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах Цель: изучить особенности роста микроорганизмов на жидких питательных средах. Самостоятельная работа: описать культуральные свойства бактерий на МПБ и 1% ПВ, зарисовать, сделать вывод.
Опыт № 1 Опыт № 2 Опыт № 3 МПБ МПБ 1% пептонная вода (кишечная палочка) (возбудитель газовой гангрены) (возбудитель холеры) Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ А) что изображено на схеме? Б) охарактеризовать все фазы процесса.
1 2 3 4 ______________________________________________________________________________ Подпись преподавателя______________________________________________________________ Теоретическая справка к работе № 1 Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий Бактериологический метод является основным при диагностике инфекционных заболеваний. Его сущность заключается в определении вида возбудителя инфекции, следовательно, можно поставить этиологический (окончательный) диагноз. Основной недостаток метода – длительность исследования – от 3-х до 5-ти суток, а в отдельных случаях и более. Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию. При этом необходимо соблюдать ряд правил: 1. Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после введения последней дозы антибиотика. Чтобы избежать загрязнения пробы микрофлорой окружающей среды, необходимо соблюдать строжайшую антисептику. Для этого используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); б) проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; в) шприц для взятия крови, гноя; г) стерильную посуду для непосредственного сбора в нее мочи, мокроты, испражнений. 2. Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах. 3. Направление прилагают к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа. Оно содержит основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования: - фамилия, имя, отчество, возраст пациента; - предполагаемый диагноз заболевания; - предшествующая антимикробная терапия; - характер материала; - дата и время взятия материала; - цель исследования; - название лечебного учреждения, номер отделения, палаты; - подпись лечащего врача. Бактериологический метод осуществляется в два этапа: 1. Выделение чистой культуры возбудителя (1-2 суток). 2. Идентификация чистой культуры (1-3 суток). На первом этапе проводится посев исследуемого материала на плотную или жидкую питательную среду, оценка культуральных свойств (характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах; они устанавливаются по характеру роста на питательной среде), отбор подозрительных колоний и их отсев на скошенный агар. Этап идентификации включает обязательное изучение морфологии, биохимических свойств и антигенной структуры выделенной чистой культуры, а также проведение дополнительных исследований по определению антибиотикочувствительности, фагочувствительности, фаготипирования, изучение патогенности и персистентных свойств. К работе № 2 Микроорганизмам, как всему живому, присущи три основные физиологические функции: питание, дыхание и размножение. Питание необходимо для синтеза в клетке всех органических структур, оно осуществляется с поглощением энергии. Основным источником энергии являются окислительно-восстановительные процессы (дыхание). Для питания нужны органогены: О, С, Н, N, F, K, Mg, Ca; микроэлементы: Na, Zn, Cu, Cl, Mn, Mo, Co, Ni, W; факторы роста: витамины, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, липиды. Кислород и водород микробы берут из воздуха и воды. По типу питания микробы делятся на аутотрофов и гетеротрофов. Аутотрофы усваивают азот и углерод из неорганических веществ (углекислый газ и др.), а гетеротрофы - из сложных органических соединений (аминокислоты, моносахара и др.), синтезированных ранее другими живыми организмами. Гетеротрофы в свою очередь делятся на сапрофитов и паразитов. Сапрофиты нуждаются в органических соединениях мертвого субстрата, а паразиты получают питательные вещества в организме-хозяине. Паразиты могут быть облигатными (внутриклеточными) и факультативными. Облигатные внутриклеточные паразиты (хламидии) лишены способности жить и размножаться вне клеток хозяина, т.к. зависят от их метаболизма. Факультативные паразиты (гонококки, стафилококки и др.) могут питаться как в организме, так и вне его, поскольку обеспечены автономными ферментными системами при образовании веществ и энергии. К работе № 3, 4 Метод Дригальского Берут 3 чашки Петри с МПА, стерильной пипеткой материал помещают на поверхность МПА в чашку № 1 посев шпателем (газоном) посев петлей (штрихом) Стерильным шпателем материал Чашку Петри с МПА делят на тщательно распределяют по 4 сектора. Исследуемый мате- поверхности агара. Затем, не беря риал стерильной петлей вносят нового материала и, не обжигая в 1 сектор и делают штрихи, шпателя, делают посев на 2 и 3 затем такие же линии проводят чашку МПА. и на других секторах. На последних секторах вырастают отдельные колонии. 1 2 3 1 2
изолированные колонии 4 3 4 сектор - изолированные колонии Снижение концентрации микробов Колония – видимое невооруженным взглядом скопление микробов на плотной питательной среде, выросшее из одной клетки. Т.к. все микробы в колонии выросли из одной клетки, они относятся к одному виду, т.е. в каждой изолированной колонии (отдельно стоящей, не сливающейся с другими колониями) содержится чистая культура. Метод седиментации по Коху -основан на свободном оседании микроорганизмов на питательную среду в чашку Петри из воздуха. Применяется для определения загрязненности воздуха микроорганизмами. Метод укола -применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, т.к. рост по ходу укола типичен для ряда бактерий. Также применяется для длительного хранения культур. Посев на скошенный агар – применяется для накопления биомассы, получения чистой культуры и их хранения. Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине. Этот метод применяется для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).
Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов Метод Шукевича Техника посева. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды дают «ползущий» рост по скошенному агару. Для получения чистой культуры ее отсевают с верхнего края посева. Метод прогревания Позволяет отделить спорообразующие бациллы от неспоровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 мин. Вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают. Бактериостатический метод (метод ингибирования) Основан на избирательном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы. Например, антибиотики позволяют очистить исследуемый вируссодержащий материал от сопутствующей бактериальной флоры. Серная кислота (5% р-р) быстро убивает большинство бактерий, а туберкулезная палочка выживает в этих условиях. Метод заражения лабораторных животных или растений Применяют в целях выделения и идентификации патогенных микроорганизмов и отделения их от сапрофитной флоры. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных или сорта растений. После появления у зараженных организмов признаков болезни их убивают и производят посев органов и тканей на питательные среды. При выделении и изучении облигатных паразитов этот метод является основным и единственным. Посев на жидкие питательные среды Применяют для изучения типа дыхания микробов. Посев проводится петлей или пипеткой. Дыхание микроорганизмов – биологическое окисление субстрата с выделением необходимой для метаболизма энергии. По типу дыхания микроорганизмы делятся на 3 основные группы: аэробы могут жить только в присутствии кислорода (холерный вибрион) – рост на поверхности питательной среды; факультативные анаэробы могут жить при любом процентном содержании кислорода и без него (кишечная палочка) – диффузный рост в толще питательной среды; анаэробы (облигатные) – только в отсутствие кислорода (возбудители газовой гангрены) – придонный рост.
к работе № 5 Стоматологический факультет ЗАНЯТИЕ № 1.1.4
ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ
Цель занятия: изучить культуральные и биохимические свойства бактерий; основные биологические свойства аэробов, методы выявления чистых культур аэробов с целью их идентификации.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
· описать культуральные и биохимические свойства бактерий.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней; методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей. Работа № 1. Методы выделения и идентификации аэробных бактерий Цель: изучить основные методы выделения и идентификации аэробов (см. теоретическую справку). I
II
А)
Ж)
) Е)
В) Д)
Реакция агглютинации
I. Сбор исследуемого материала II. Посев исследуемых микроорганизмов на простые, ДДС и элективные питательные среды с целью получения изолированных колоний III. Накопление чистой культуры на скошенной питательной среде IV. Идентификация выделенной чистой культуры А) изучение морфологических и тинкториальных свойств Б) изучение культуральных свойств В) изучение антигенной структуры возбудителя с помощью постановки реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными сыворотками Г) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на среды Гисса Д) определение чувствительности микробов к антибиотикам, с помощью метода бумажных дисков Е) проба с бактериофагами (реакция фаголизабельности) Ж) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания * проведение внутривидовой идентификации для выявления источников инфекции (фаготипирование)
Работа № 2. Питательные среды
Цель: ознакомиться с питательными средами, используемыми для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях.
Самостоятельная работа: классифицировать предложенные питательные среды; результаты оформить в виде таблицы (см. теоретическую справку).
Вывод:
Работа № 3. Характер роста бактерий на плотных питательных средах (культуральные свойства)
Цель: изучить культуральные свойства микроорганизмов на плотных питательных средах. Самостоятельная работа: по предложенным критериям описать колонии микроорганизмов, выросших на МПА (посев воздуха); результаты внести в таблицу; сделать вывод.
Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах Цель: изучить особенности роста микроорганизмов на жидких питательных средах. Самостоятельная работа: описать культуральные свойства бактерий на МПБ и 1% ПВ, зарисовать, сделать вывод.
Опыт № 1 Опыт № 2 Опыт № 3 МПБ МПБ 1% пептонная вода (кишечная палочка) (возбудитель газовой гангрены) (возбудитель холеры) Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Конфликты в семейной жизни. Как это изменить? Редкий брак и взаимоотношения существуют без конфликтов и напряженности. Через это проходят все... Что вызывает тренды на фондовых и товарных рынках Объяснение теории грузового поезда Первые 17 лет моих рыночных исследований сводились к попыткам вычислить, когда этот... ЧТО ПРОИСХОДИТ, КОГДА МЫ ССОРИМСЯ Не понимая различий, существующих между мужчинами и женщинами, очень легко довести дело до ссоры... Что делать, если нет взаимности? А теперь спустимся с небес на землю. Приземлились? Продолжаем разговор... Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
|