|
Правила микроскопии. Ошибки при работе с микроскопом. Уход за микроскопом
| Порядок работы
| Ошибки при работе
| | 1. С помощью зеркала установить освещение
|
| | 2. На препарат нанести каплю иммерсионного масла и поместить стекло на предметный столик, укрепив зажимами
| Капля масла должна быть оптимального объема: слишком большая растечется в слой, маленькая – не позволит добиться четкого изображения
| | 3. Повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива х90
|
| | 4. Под контролем зрения сбоку медленно погрузить иммерсионный объектив в каплю масла, пока объектив не соприкоснется со стеклом
| Работая быстро и не контролируя работу сбоку, можно объективом раздавить стекло
|
Окончание табл. 26
| Порядок работы
| Ошибки при работе
| | 5. Глядя в окуляр, медленно вращать макровинт на себя, пока не промелькнет изображение препарата
| Вращая макровинт быстро, можно не заметить изображение препарата
| | 6. Провести окончательную фокусировку препарата микровинтом, вращая его в пределах одного оборота
| Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, т.к. это может повлечь поломку стекла или фронтальной линзы
| | 7. По окончании работы необходимо удалить масло с объектива, прикасаясь к нему салфеткой
| Не тереть! Засохшее масло на салфетке может поцарапать линзу
| | 8. Револьвер поставить в нейтральное положение, на предметный столик положить салфетку и опустить тубус
| В результате нарушения этих пунктов может быть сорвана резьба, по которой поднимается и опускается тубус, и микроскоп будет выведен из строя
| | 9. Микроскоп переносят двумя руками: одной держат за тубус, другой придерживают микроскоп снизу!
|
Таблица 27
Техника приготовления препаратов
| Последовательность действий
| | 1. На стекло петлей нанести каплю воды, внести в нее культуру и растереть, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. Диаметр мазка должен быть равен 1 см
| | 2. Высушить на воздухе
| | 3. Зафиксировать: предметное стекло мазком вверх 3 раза провести над пламенем горелки
| | 4. Окрасить
|
Таблица 28
Методы окраски мазков
| Простые
| Сложные
| | Используется один краситель:
фуксин,
Бурри
| Используется несколько красителей:
Грама,
Ожешки,
Нейссера,
Циля – Нильсена,
Бурри – Гинса
|
Таблица 29
Приготовление препаратов для изучения бактерий
В живом состоянии
| Метод «раздавленной» капли
| Метод «висячей» капли
| | 1. На поверхность обезжиренного стекла нанести суспензию бактерий и накрыть покровным стеклом.
2. Микроскопировать препарат с объективом х40
| 1. В центр покровного стекла нанести суспензию бактерий
2. Предметное стекло с лункой, края которой смазаны твердым вазелином, прижать к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки
3. Быстрым движением перевернуть препарат покровным стеклом вверх, капля должна висеть над лункой, не касаясь ее дна или края
4. С оъективом х8 найти край капли
5. С объективом х40 изучать препарат
|
Таблица 30
Окраска по методу Бурри
| Последовательность действий
| | 1. На стекло петлей нанести каплю спиртового раствора туши
| | 2. Внести туда культуру и растереть
| | 3. Высушить
| | 4. Не фиксировать!
| | 5. Микроскопировать с объективом х40
| | На черном или сером фоне видны неокрашенные клетки бактерий
|
Таблица 31
Окраска по методу Грама
| Последовательность действий
| Время
| | 1. На мазок нанести бумажку, пропитанную раствором генцианвиолетта
|
1-2 мин
| | 2. Нанести раствор Люголя
| 1-2 мин
| | 3. Нанести этиловый спирт
| 30-60 с
| | 4. Промыть водой
|
| | 5. Нанести бумажку, пропитанную раствором фуксина
| 1-2 мин
| | 6. Промыть водой
|
| | 7. Высушить и микроскопировать с объективом х90
|
| | Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розовый
|
Таблица 32
Обнаружение капсул по методу Бурри – Гинса
| Последовательность действий
| Время
| | 1. На стекло нанести каплю раствора туши, внести туда культуру и равномерно распределить по стеклу
|
| | 2. Высушить
|
| | 3. Зафиксировать над пламенем спиртовки
|
| | 4. Нанести водный раствор фуксина
| 1-2мин
| | 5. Промыть водой, высушить
|
| | 6. Микроскопировать с объективом х90
|
| | Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно-розовом фоне
|
Таблица 33
Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу
Циля – Нильсена
| Последовательность действий
| Время
| | 1. На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги, подогреть до появления паров
|
3-5 мин
| | 2. Снять бумагу, промыть водой
|
| | 3. Опустить мазок в стаканчик с 5% серной кислотой для обесцвечивания
| 5 с
| | 4. Промыть водой
|
| | 5. Нанести водный раствор метиленового синего
| 3-5 мин
| | 6. Промыть водой, высушить
|
| | 7. Микроскопировать с объективом х90
|
| | Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, некислотоустойчивые – в голубой
|
Таблица 34
Окраска спор по методу Ожешки
| Последовательность действий
| Время
| | 1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор
хлороводородной кислоты и подогреть на пламени
|
2-3 мин
| | 2. Кислоту слить, препарат остудить, промыть водой
|
| | 3. Просушить и зафиксировать над пламенем
|
| | 4. На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги, подогреть до появления паров
|
3-5 мин
| | 5. Снять бумагу, промыть водой
|
| | 6. Опустить мазок в стаканчик с 5% серной кислотой для обесцвечивания
| 5 с
| | 7. Промыть водой
|
| | 8. Нанести водный раствор метиленового синего
| 3-5 мин
| | 9. Промыть водой, высушить
|
| | 10. Микроскопировать с объективом х90
|
| | Споры окрашиваются в розовый цвет, вегетативные клетки – в голубой
|
Таблица 35
Окраска зерен волютина по методу Нейссера
| Последовательность действий
| Время
| | 1. На фиксированный мазок нанести ацетат синьки
Нейссера
|
2-3 мин
| | 2. Нанести раствор Люголя
| 10-30 с
| | 3. Промыть водой
|
| | 4. Нанести водный раствор везувина или
хризоидина
| 0,5-1 мин
| | 5. Промыть водой, высушить
|
| | 6. Микроскопировать с объективом х90
|
| | Зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет, цитоплазма клеток – в желтый
|
Таблица 36
Окраска спирохет по методу Романовского – Гимзы
| Последовательность действий
| Время
| | 1. На фиксированный мазок нанести рабочий раствор красителя (смесь метиленового синего, эозина и азура; 2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды)
|
10-20 мин
| | 2. Промыть водой, высушить на воздухе
|
| | 3. Микроскопировать с объективом х90
|
| | Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии – в сине-фиолетовый, лептоспиры – в розово-сиреневыйх
| ____________________
х – лептоспиры окрашиваются с большим трудом.
Таблица 37
Окраска риккетсий по методу Здродовского
| Последовательность действий
| Время
| | 1. Нанести фуксин Циля
| 5 мин
| | 2. Промыть водой
|
| | 3. Нанести раствор 0,01% хлороводородной кислоты
| 30 с
| | 4. Промыть водой
|
| | 5. Нанести раствор метиленового синего
| 1 мин
| | 6. Промыть водой, высушить
|
| | 7. Микроскопировать с объективом х90
|
| | Риккетсии окрашиваются в красный цвет, цитоплазма клеток, в которых они паразитируют, – в голубой, ядра – в синий
|
ФИЗИОЛОГИЯ БОЛЕЗНЕТВОРНЫХ БАКТЕРИЙ
Физиология бактерий изучает их жизнедеятельность, процессы питания, обмена, дыхания, роста, размножения и взаимодействия с окружающей средой.
Таблица 38
Химический состав бактерий
| Вода
| Химические элементы (15-25%) х
| | Органогены
| Макроэле-менты
| Микроэле-менты
| | 75-85%
Необходима:
1) для рас-творения химических соединений,
2) для осуществления реакций метаболизма
| Углерод
Азот
Водород
Кислород
| Фосфор
Калий
Натрий
Сера
Магний
Кальций
Хлор
Железо
| Марганец
Цинк
Молибден
Бор
Хром
Кобальт
| | Биополимерыхх
| | Нуклеиновые кислоты
| Белки
| Липиды
| Углеводы
| | 10% - РНК
(функция: биосинтез белка),
3-4% - ДНК
(наследственность)
| 50-75%
большинство из них ферменты, токсины, струк-турные белки
| Жирные кислоты
Нейтральные жиры, воск
Фосфолипиды
Гликолипиды
(входят в состав ЦПМ и КС)ххх
| Моносахариды
Олигосахариды
Полисахариды
| ________________
х - обнаруживаются в золе после сжигания, входят в состав биополимеров;
хх – процентный состав приводится на сухую массу клетки;
ххх – ЦПМ – цитоплазматическая мембрана, КС – клеточная стенка.
Таблица 39
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:
|
