Сдам Сам

ПОЛЕЗНОЕ


КАТЕГОРИИ







Влияние рН среды на активность амилазы слюны





Каждый фермент проявляет максимум своего каталитического действия при строго определенном рН среды.

Реактивы: раствор слюны (свежую слюну разводят водой в 100 раз); 0,5 %-й раствор крахмала;0,1 М раствор лимонной кислоты;0,2 М раствор гидрофосфата натрия; раствор иода в иодиде калия (см. работу №11).

Оборудование: пробирки; водяная баня; пипетки.

Ход работы

  1. В 7 пронумерованных пробирок налейте растворы лимонной кислоты и гидрофосфата натрия в количествах, указанных в табл., получая таким образом буферные смеси со значениями рН от 5.6 до 8,0.
  2. В каждую пробирку добавьте 10 капель 1 %-го раствора хлорида натрия, 10 капель 0,5 %-го раствора крахмала и 10 капель раствора слюны.
№ пробирки Объем 0,2 Мраствора Na2HPO4, см3 Объем0,1 Мраствора лимонной кислоты, см3 рН буферной смеси Окраска раствора после добавления иода
0,58 0,42 5,6  
0,63 0,37 6,0  
0,69 0,31 6,4  
0,77 0,23 6,8  
0,87 0,13 7,2  
0,94 0,06 7,6  
0,97 0,03 8,0  
  1. Содержимое хорошо перемешайте и поставьте пробирки в водяную баню при температуре 3738 оС.
  2. Через 10 мин. пробирки быстро охладите и добавьте в каждую пробирку по капле раствора иода.
  3. Содержимое пробирок перемешайте и сравните окраску полученных растворов.

Оформление результатов

Результаты исследования оформите, заполнив вышеприведенную таблицу. Установите, при каком рН произошло наиболее полное расщепление крахмала (желтая или буровато-желтая окраска с иодом).

ЛАБОРАТОРНАЯ работа №4

Определение активности каталазы

Каталаза – фермент, катализирующий реакцию расщепления пероксида водорода с образованием кислорода и воды. За ходом реакции можно следить по объему выделившегося кислорода.



Реактивы и материалы: растительный материал (листья или корни хрена, свежепророщенные семена или клубень картофеля); мел; 3 %-ный раствор пероксида водорода.

Оборудование: установка для сбора газа (рис.37); ступка с пестиком; стакан.

Рис.5. Газометрический прибор для определения активности каталазы. 1 – реакционная колба; 2 – зажим; 3 – бюретка с делениями; 4 – сосудик для раствора пероксида водорода; 5 – делительная воронка. Стеклянные части прибора соединены резиновой трубкой.

Ход работы

1. Растительный материал (0,5 г) разотрите в ступке с 20 см3 дистиллированной воды с добавлением небольшого количества мела (для создания слабощелочной среды). Оптимальное значение рН для каталазы составляет 7,7.

2. Гомогенат ткани оставьте на 510 мин. для отстаивания и затем полученный раствор перенесите в реакционную колбу (1).

  1. В небольшой сосудик (4) влейте 5 см3 3 %-го раствора пероксида водорода и осторожно пинцетом поставьте его внутрь реакционной колбы (1).
  2. При открытом зажиме (2) осторожно плотно закройте реакционную колбу (1) пробкой газометрического прибора.
  3. Закройте зажимом (2) сообщение с атмосферой и одновременно переверните сосудик (4) с перекисью внутри реакционной колбы (1). Пероксид смешивается с гомогенатом, содержащим каталазу, что вызовет разложение пероксида и выделение кислорода.
  4. Выделяющийся кислород, попадая сверху в бюретку (3), будет отжимать воду вниз. По понижению уровня воды в бюретке судят об объеме выделившегося кислорода. Для того чтобы выровнять давление выделяющегося кислорода с атмосферным давлением, необходимо выровнять уровни воды в бюретке и воронке (5), опуская воронку (5) вниз.
  5. Определите объем выделившегося кислорода через разные промежутки времени от начала реакции (1, 2, 3, 4, 5 мин.).
  6. Рассчитайте активность каталазы по формуле:

 

где A – активность каталазы, см3/г•мин.; m – масса навески ткани, г; t – время, мин. Найдите среднее значение.

Оформление результатов

Результаты проведенного исследования оформите в виде таблицы.

Время, мин Объем кислорода, см3 Масса навески растительного сырья, г Активность каталазы
       

 

Тема: ЛИПИДЫ

Липиды представляют собой неоднородную группу химических соединений, нерастворимых в воде, но хорошо растворимых в неполярных органических растворителях: хлороформе, эфире, ацетоне, бензоле и др., т.е. общим их свойством является гидрофобность (гидро – вода, фобия – боязнь). Из–за большого разнообразия липидов дать более точное определение им невозможно. Подразделяют липиды на простые (содержат только остатки жирных кислот, спиртов (альдегидов) и сложные (содержат остатки также фосфорной, фосфоновой кислот, моно– и олигосахаридов). Липиды в большинстве случаев являются сложными эфирами жирных кислот и какого–либо спирта. Выделяют следующие классы липидов: триацилглицерины, или жиры, фосфолипиды, гликолипиды, стероиды, воска, терпены. Различают две категории липидов – омыляемые и неомыляемые. К омыляемым относятся вещества, содержащие сложноэфирную связь (воска, триацилглицерины, фосфолипиды и др.). К неомыляемым относятся стероиды, терпены.

Триацилглицерины являются сложными эфирами трехатомного спирта глицерина:

Фосфолипиды содержат гидрофобную и гидрофильную области и поэтому обладают амфифильнымы свойствами, т.е. они способны растворяться в неполярных растворителях и образовывать стойкие эмульсии с водой.

Фосфолипиды в зависимости от наличия в их составе спиртов глицерина и сфингозина делятся на глицерофосфолипиды и сфингофосфолипиды.

Формулу глицерофосфолипидов можно представить так:

где Х – остаток НО–содержащей полярной молекулы (полярная группировка).

Сфингофосфолипиды по составу сходны с глицерофосфолипидами, но вместо глицерина содержат аминоспирт сфингозин.

Наиболее распространенными сфингофосфолипидами являются сфингомиелины. Они образованы сфингозином, холином, жирной кислотой и фосфорной кислотой:

Гликолипиды содержат в своем составе углеводный компонент. К ним относятся гликосфинголипиды, содержащие, кроме углевода спирт, сфингозин и остаток жирной кислоты:

Стероиды являются производными циклопентанпергидрофенантрена. Один из важнейших представителей стероидов – холестерин. В организме он встречается как в свободном состоянии, так и в связанном, образуя сложные эфиры с жирными кислотами.

Воска – это сложные эфиры, образованные длинноцепочечными жирными кислотами (число атомов углерода 14 – 36) и длинноцепочечными одноатомными спиртами (число атомов углерода 16 – 22). В качестве примера рассмотрим формулу воска, образованного олеиновым спиртом и олеиновой кислотой:

В основе терпеновых соединений лежат изопреновые остатки:

К терпенам относятся эфирные масла, смоляные кислоты, каучук, каротины, витамин А, сквален. В качестве примера приведем формулу сквалена:

Сквален является основным компонентом секрета сальных желез.

Лабораторная работа №1

Физико–химические свойства жиров

Реактивы и материалы: растительное масло; твердый жир; яблоко; картофель; гексан (бензин); этиловый спирт; ацетон; 2 %–й раствор карбоната натрия; 2 %–й раствор мыла; дистиллированная вода.

Оборудование: пробирки; водяная баня; фильтровальная бумага.

Ход работы

Задание 1. Образование масляного пятна.

  1. Каплю растительного масла нанесите на кусочек бумаги. Образуется пятно.
  2. Кусочек свиного сала, яблока, картофеля раздавите на кусочке бумаги с образованием пятна.
  3. Нагрейте бумагу с пятнами на слабо нагретой плитке. Пятно, образованное жиром, не исчезает при нагревании.

Задание 2. Растворимость жиров.

  1. Поставьте два ряда пробирок по 4 в каждом.
  2. В пробирки первого ряда внесите по 3 капли растительного масла, в пробирки второго ряда – по кусочку твердого жира.
  3. В первую пробирку каждого ряда прилейте 2 см3 дистиллированной воды, во вторую – столько же гексана или бензина; в третью – ацетона и в четвертую – спирта.
  4. Все пробирки взболтайте и наблюдайте за растворимостью жиров в различных растворителях. Пробирки со спиртом рекомендуется нагреть на водяной бане.

Задание 3. Эмульгирование жирных масел.

  1. В три пробирки внесите по 5 капель растительного масла.
  2. В первую пробирку добавьте 2 см3 дистиллированной воды, во вторую – 2 см3 2 %–го раствора карбоната натрия, в третью – столько же 2 %–го раствора мыла.
  3. Содержимое пробирок сильно взболтайте. В первой пробирке образуется неустойчивая эмульсия масла в воде, в остальных – устойчивая эмульсия благодаря действию эмульгаторов, которые, адсорбируясь на поверхности жировых капель, придают им одинаковый заряд и снижают поверхностное натяжение.

Оформление результатов

Оформите результаты проведенных исследований в виде таблицы.

№ задания Краткое описание опыта Наблюдаемое явление Вывод
       

Лабораторная работа №2

Получение мыла и изучение его свойств

При взаимодействии жиров со щелочами происходит их гидролиз с образованием солей высших жирных кислот (мыла) и глицерина. Натриевые соли представляют собой твердые мыла, калиевые – жидкие. Реакция идет согласно уравнению

Реактивы: растительное масло или животный жир; 30 %–й спиртовой раствор гидроксида калия; 15 %–й раствор соляной кислоты; 10 %–й раствор хлорида кальция; дистиллированная вода.

Оборудование: широкая пробирка с резиновой пробкой со вставленной в нее стеклянной трубкой; пробирки; водяная баня.

Ход работы

При выполнении данной работы необходимо соблюдать особую осторожность!

Задание 1. Омыление жира

1. В широкую пробирку внесите 1 см3 растительного масла или около 1 г животного жира и добавьте 10 см3 спиртового раствора гидроксида калия.

2. Пробирку закройте пробкой с воздушным холодильником и нагревайте на кипящей водяной бане в течение 25 – 30 мин. Эту часть работы необходимо проводить в вытяжном шкафу.

3. После нагревания в пробирку налейте 10 см3 горячей воды. Образуется гомогенный раствор калиевых солей жирных кислот (калиевого мыла). Данный препарат использовать для мытья рук, лица и других хозяйственных целей категорически запрещено!

Задание 2. Выделение свободных жирных кислот.

  1. К 3 см3 полученного в первом задании раствора осторожно добавьте порциями 15 %–й раствор соляной кислоты до выделения свободных жирных кислот, которые всплывают на поверхность жидкости.

Задание 3. Образование нерастворимого мыла.

1. К 2 см3 раствора, полученного в задании 1, добавьте 1 см3 10 %–го раствора хлорида кальция. Выпадают хлопья нерастворимого в воде осадка кальциевой соли высших карбоновых кислот.

Оформление результатов

Опишите ход выполнения работы. Приведите уравнения протекавших реакций.

Лабораторная работа №3

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КИСЛОТНОГО И ИОДНОГО ЧИСЕЛ ЖИРА

Цель работы:ознакомиться с методом определения кислотного и йодного чисел жира.

Принцип метода.Кислотностью жира или кислотным числом называется число миллиграммов едкого калия, необходимое для нейтрализации свободных жирных кислот, содержащихся в1 г жира.

Материалы и оборудование:спирт, нейтрализованный по фенолфталеину, раствор KOH (0,1 моль/л), 0,1 %-й раствор фенолфталеина, жир (подсолнечное масло).

Оборудование: колбы емкостью 50 мл, пипетки, бюретки, пробирки.

Ход работы

K 1 гжира добавляют 5 мл спирта, нейтрализованного по фенофталеину, тщательно перемешивают для максимального растворения свободных жирных кислот и титруют раствором KOH до появления не исчезающей после взбалтывания розовой окраски (окраска не должна исчезать в течение 0,5—1 мин).

Количество KOH, мг, или кислотное число (КЧ), которое необходимо для титрования свободных жирных кислот в1 гжира, равняется

КЧ=AfQ/a,

где A – объем раствора KOH (0,1 моль/л), израсходованного на титрование исследуемой пробы; а — навеска жира (г); f — коэффициент поправки на титрраствора KOH (0,1 моль/л); Q — количество KOH (5,61 мг) эквивалентное 1 мл раствора KOH (0,1 моль/л).

Принцип метода. Иодным числом называется количество граммов иода, которое прореагировало с100 г жира. Это число указывает на содержание в жире непредельных жирных кислот.

Определение иодного числа основывается на реакции присоединения иода по месту двойной связи, которая протекает по уравнению:

R–CH=CH–R+I2+H2O®R–CHI–CHOH–R+HI.

Реактивы: жир, спиртовый раствор иода (0,1 моль/л), 1 %–й раствор крахмала, раствор Na2S2O3 (0,05 моль/л).

Оборудование: две конические колбы емкостью 50 мл, пипетки, бюретки.

Ход работы

B первую колбу помещают навеску жира 0,1 – 0,2 г(исследуемая проба), во вторую – 0,1–0,2 мл воды (контрольная проба), прибавляют по 10 мл спиртового раствора иода и перемешивают. Через 15 мин содержимое колб оттитровывают раствором Na2S2O3 сначала до появления слабо–желтого окрашивания, а потом, прибавив 1 мл раствора крахмала, титруют до исчезновения синего окрашивания. Иодное число вычисляют по формуле:

ИЧ=(B–A)fQ100/(1000a),

где В A – разность результатов титрования контрольного и опытного образцов в растворе гипосульфита (0,05 моль/л) (мл); а — навеска исследуемого жира (г);

f — коэффициент поправки на титр раствора Na2S2O3 (0,05 моль/л);

Q — количество J2 (12,69 мг), эквивалентное 1 мл раствора Na2S2O3 (0,05 моль/л).

Лабораторная работа №4

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ ЛИПИДОВ В ТКАНЯХ

Цель работы:ознакомиться с весовым методом определения общего содержания липидов в тканях.

Принцип метода.Липиды экстрагируют из тканей смесью Фолча, экстракт отмывают от нелипидных примесей солевым раствором. Количественное определение суммарных липидов проводят весовым методом.

Реактивы:

1. Хлороформ. 2. Метанол. 3. Смесь хлороформ – метанол в соотношении 2:1 по объему (смесь №1). 4. NaCl 0,73 % водный раствор (можно заменить 0,88 % KCl, 0,05 % CaCl2). 5. Смесь растворителей, содержащая минеральные соли: хлороформ-метанол-водный раствор NaCl (0,58 %) или KCl (0,74 %) или СаС12 (0,04 %) в соотношении 3:48:47 (смесь №2).

Оборудование: пробирки, гомогенизатор, центрифуга, сушильный шкаф, аналитические весы.

Ход работы

Измельченную на холоде навеску ткани (200 – 250 мг мозга, 300 – 500 мг других тканей) помещают в гомогенизатор с тефлоновым или стеклянным пестиком, заливают 5 объемами смеси №1 и гомогенизируют в течение 5 мин. Экстракт отделяют от биомассы, сливают в мерный цилиндр. Процедуру повторяют еще 2 – 3 раза. Измельченную ткань вместе с экстрактом количественно переносят в мерный цилиндр (конечное разведение ткани 1:20), перемешивают и через 20 мин фильтруют через обезжиренный фильтр или центрифугируют при 1000 gв течение 15 – 20 мин K центрифугату добавляют 0,73 %–й водный раствор хлорида натрия в объеме, составляющем 20 % от объема экстракта липидов. Экстракт перемешивают и центрифугируют при 600 g в течение 15 – 20 мин. После центрифугирования система разделяется на две фазы. Верхнюю фазу осторожно декантируют с помощью шприца и пипетки с оттянутым концом, отбрасывают. Поверхность нижней фазы и внутренние стенки центрифужной пробирки ополаскивают 3 мл смеси №2, тщательно следя за тем, чтобы не было перемешивания нижней фазы и промывной смеси. Последнюю отбрасывают и промывание повторяют еще 2 раза. После удаления промывной смеси к нижней фазе, т.е. к хлороформному раствору липидов, прибавляют по каплям метанол до образования однофазной системы, раствор перемешивают.

Количество липидов определяют весовым методом. Для этого круглодонную колбу для роторного испарителя доводят до постоянного веса, помещают в нее экстракт липидов, содержащий не менее 10 – 20 мг липидов, растворитель упаривают на роторном испарителе. Колбу с осадком липидов доводят до постоянного веса в вакуумэксикаторе над KOH. Путем повторного взвешивания определяют вес осадка липидов и рассчитывают содержание липидов в тканях в процентах с учетом взятой навески. Взвешивание проводят на аналитических весах.

Лабораторная работа №5

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ОБЩИХ ФОСФОЛИПИДОВ В ТКАНЯХ

Цель работы:ознакомиться с фотометрическим методом определения содержания общих фосфолипидов в тканях.

Принцип метода. Метод основан на определении неорганического фосфора, образованного при кислотном гидролизе фосфолипидов. Содержание фосфора определяют по образованию комплекса с молибдатом аммония и его восстановлению аскорбатом до появления интенсивно синего цвета с максимумом светопоглощения 750 нм.

Реактивы: молибдат аммония 2 % раствор; аскорбиновая кислота 2 % раствор; 20 % ТХУ; 40 % КОН, приборы и реактивы.

Оборудование: пробирки, кюветы, спектрофотометр, гомогенизатор, центрифуга с охлаждением.

Ход работы

К 0,5 мл раствора липидов в хлороформе прибавить 1 мл концентрированной хлорной кислоты и сжигать при температуре около 180 °C. После охлаждения объем довести водой до 2 мл, отобрать 0,2 мл и добавить 1,8 мл воды, a затем 0,2 мл 10% аскорбата, 2 мл 1 % молибдата аммония. После 20-минутной инкубации в 45 °C, измерить оптическую плотность при 750 нм. Аналогично поступить с пробой стандартного раствора фосфата и с пробой на чистоту реактивов (Кейтс, 1975).









Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:


©2015- 2019 zdamsam.ru Размещенные материалы защищены законодательством РФ.